鲍杂交育种及胚胎发育与蛋白质组学研究.pdf

摘要 摘要 鲍是我国重要养殖贝类，但近年来由于种质退化及环境污染的加剧，鲍的 养殖面临着严重的病害威胁。杂交是目前水产生物育种中应用广泛、行之有效 的育种途径之一，以培育生长迅速、抗逆性强的鲍养殖新品种为主要目的。本 研究运用蛋白质组学技术方法(双向电泳、串联质谱、数据库搜索)，对西氏鲍 (Haliotis discus hannai)种间杂交、杂色鲍 gigantean)与皱纹盘鲍(Halioti (Haliotis diversicolor)群体间杂交以及杂色鲍胚胎发育过程等的蛋白质表达进 行了比较分析，目的是为杂交优势分子机理解析和杂交育种方法提供参考依据。 主要结果如下： 1．鲍种间杂交子代及其亲本系谱的蛋白质组分析 在杂种优势的研究中，如何准确地预测在子代的表型变化仍然是一个问题。 和它们正反交杂交后代(DG和GD)之间的蛋白表达图谱，我们观察到正反杂 交后代和亲本之间的足部肌肉中蛋白点的数量分别是：DD平均为673±21 19。和肌肉中蛋白点的数量相比，鲍血淋巴蛋白点数量明显降低，DD平均为 双向电泳图像比较和蛋白鉴定表明四种鲍肌肉蛋白点存在差异。不同的双向电 泳图像显示肌肉蛋白点杂种Fl与亲本存在镜像关系。此外，发现IX}和GD所 示的差异点均来自它们亲本的双向电泳图像。从足部肌肉蛋白中，我们识别出 136个蛋白，主要参与能量代谢和胁迫应答等生理功能，在参与能量代谢的蛋 白中，DD中的表达量普遍较高，杂交后代的表达量在两亲本的表达量之间， 参与胁迫应答的蛋白表达量在四种鲍间的表达模式不太一致。双向电泳图像比 较和蛋白鉴定结果表明四种鲍问的肌肉蛋白的表达有明显的不同。 用双向电泳和质谱(MALDI．TOF．TOF)技术比较了西氏鲍(G)、皱纹盘 鲍(D)以及它们杂交后代卵子之间的蛋白表达图谱，卵的双向电泳图像显示 的蛋白点数目较多，DD平均为9154-19个点，GG平均为9354-16个点，GD 摘要 平均为9234-13个点。系统聚类分析表明，DD和GG的距离最大，DD和GD 先聚为一类。共鉴定出112个凝胶点，其中有59个点与鲍蛋白质数据库匹配 (52．7％的识别率)。鉴别出的蛋白主要参与蛋白质生物合成、肌肉收缩和调节、 分子伴侣、电子载体、脂类代谢、胁迫反应、核酸代谢、蛋白质折叠、蛋白质 氨基酸的磷酸化、翻译过程、能量代谢、信号蛋白、细胞增殖、分化、信号传 导、氧化应激、卵黄蛋白。参与能量代谢的蛋白，包括精氨酸激酶、烯醇酶、 isomerase)、果糖二磷酸醛缩酶 磷酸丙糖异构酶(triosephosphate (fimctose．bisphosphate l dehydrogenase 3-phosphatedehydrogenase)、异柠檬酸脱氢酶(isocitrate (NADP+)，soluble．1ike)、苹果酸酶的前体(malatedehydrogenaseprecursor)、 线粒体ATP合酶、2．甲基柠檬酸脱水酶(2-methylcitratedehydratase)，其中表 达模式DDGDGG几乎覆盖了所有蛋白质种类，在DD中表达量最高，杂种 后代表现出相加性。参与胁迫反应的蛋白，在三个鲍的家族中的表达模式基本 为DDGDGG。包括超氧化物歧化酶、过氧化还原酶6、谷胱甘肽．S．转移酶。 2．“东优1号杂色鲍及其亲本足部肌肉的蛋白质组学分析 采用双向电泳和质谱技术，对杂色鲍台湾群体(TT)、日本群体(RR)和 8．0数 杂交子代“东优l号(TR)”足部肌肉蛋白进行了研究，经过PDQueSt 据分析，日本群体平均为9244-7个点，台湾群体平均为8614-11个点，杂交群体 平均为882土9个点。聚类分析表明：RR和TR先聚为一类，然后再和Tr聚为