莽草酸发酵液的快速检测方法_徐晓娟.pdfVIP

第 13卷第 1期 过 程 工 程 学 报 Vol.13 No.1 2013 年 2 月 The Chinese Journal of Process Engineering Feb. 2013 莽草酸发酵液的快速检测方法 1,2 1,2 1 1 1 徐晓娟 ， 王自强 ， 杜 英 ， 王云山 ， 苏志国 (1. 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京 100190 ；2. 中国科学院大学，北京，100049) 摘 要：建立了采用高效液相色谱法快速测定发酵液中蔗糖、莽草酸和芳香族氨基酸含量的方法，为微生物发酵生产 莽草酸的工艺控制提供便捷. 色谱条件为：Hypersil APS-2 色谱柱(5 μm, 250 mm×4.6 mm) ，检测波长215 nm ，示差检 测器和紫外检测器联用，流动相为 pH 2.5 的磷酸水溶液和乙腈(体积比 20:80) ，柱温 30 ℃，流速 1.0 mL/min，进样量 10 μL. 在该条件下所测各物质的线性回归方程相关系数均大于 0.9986，加样回收率为 95%~105%，相对标准偏差均 小于 2.0%. 关键词：高效液相色谱；蔗糖；莽草酸；芳香族氨基酸；发酵液 中图分类号：O657.7 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2013)01−0124−05 1 前 言 (L-Trp)、莽草酸(Shikimic acid)均购自美国 Sigma 公司； 色谱纯乙腈(美国 Fisher 公司)，蔗糖(北京化工厂)，其 莽草酸，化学名 3,4,5-三羟基-1-环己烯-1-羧酸，主 他试剂均为分析纯，实验用水为超纯水. [1] [2] 要存在于高等植物和微生物中 ，有一定刺激性 ，有 2.1.2 菌种与培养基 抗炎、镇痛作用，可作为抗禽流感药物磷酸奥司米韦[3−7] 菌种：枯草芽孢杆菌，实验室保藏. [8] (商品名达菲)和抗肿瘤药物二恶霉素 、乙二醛酶抑制 种子培养基(g/L) ：胰蛋白胨 10，酵母膏 5，NaCl 10. 剂[9]等的合成原料；其在生物合成中也扮演重要角色， 发酵培养基(g/L) ：K HPO 18.3 ，KH PO 6 ，蔗糖 2 4 2 4 是生物体内经由磷酸烯醇式丙酮酸与 4-磷酸赤藓糖合 80，木糖 5，酵母粉4 ，尿素 6，MgSO4 1, FeSO4 0.01, 成苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸 3 种芳香族氨基酸的中间 MnSO4 0.01 ，氯霉素 0.005. 产物[10] ，也是一些次生代谢产物的重要原料. 2.1.3 标准溶液的配制 目前发酵液中莽草酸的检测方法主要有紫外−可见 用超纯水配制 5 种标准物质的混合溶液，浓度分别 分光光度计法[11] 、毛细管电泳法[12] 、液相色谱−质谱联 为(g/L): L-Phe 0.05, L-Tyr 0.05, L-Trp 0.05