HCV核心抗原与抗-HCV联合检测试剂的研制及初步应用.pdfVIP

法，如果阳性必须用酶联免疫吸附试验复检，2种方 次实验要有内部对照和外部对照质量控制血清同患 法均阳性则送检市疾控确证。 者样本一同检测，从控制值了解分析每次实验是否 ．ELISA的基本原理是免疫反应物通过化学或可靠。内部对照是试剂盒提供的阴性和阳性对照， 免疫学方法形成酶结合物，酶结合物能与待检样品 检测成立的条件为阴性对照孔平均吸光度(A)值≤ 中相应的抗原或抗体结合成为免疫复合物，然后加 0．1，阳性对照孔A值I0．80，临界值=阴性对照孔 入酶底物，经酶的催化或水解作用。无色底物产生 A均值+0．12，一旦实验不符合这些具体条件，就应 颜色，用肉眼、分光光度计观察结果。具有敏感、 检查出现问题的原因，重新检测。外部对照是由 操作简便快捷、特异性高的特点，是临床HIV初HIV抗体阳性和阴性血清制成，但由于HIV抗体阳 筛实验搴最常用的检测方法。所以，怎样提高 性血清极少，作为临床实验室极难获得和保存的不 HIV初筛实验室的质量和标准化，是当前一个重安全，外部对照的设立有一定难度。但是外部质量 要问题。 控制是避免漏检的有力措施。 首先，实验室操作人员必须经过专业训练，具有 另外，某些疾病如血液恶性病变、自身免疫性疾 疾病控制中心颁发的HIV初筛实验培训证书。设立病、多发性胆汁型肝硬化、酒精性肝炎，疫苗接种、多 专人保养维护实验所用的仪器，定期校准仪器，使仪 发性骨髓瘤、肾移植或慢性肾衰竭、疟疾或丝虫病 器始终保持运行的最佳状态，不带病工作，确保检测 等，也可造成HIV初筛实验的假阳性。 结果的准确性。选择国家批准的具有批准文号的诊 总之，随着人们对艾滋病研究、认识的不断深 断试剂，严格控制有效期内使用。试剂从冰箱单拿 入，检测试剂的不断发展，对检验人员和HIV初筛实 出来后应平衡至室温。严格按照标准的SOP文件操验室的要求越来越严格和规范，医疗质量也不断 作规程，严格温育温度、反应时间、洗板及判读。每 提高。 HCV核心抗原与抗一HCV联合检测试剂的 研制及初步应用 吴斌吴刚强段艳平冯惊涛 欧兰香胡道奇任三莲 聂东宋 Cvirus，HCV)为嗜肝性 丙型肝炎病毒(hepatitis 笔者采用湖南景达制药有限公司研制出的HCV核 慢性病毒，人体感染HCV后慢性化发生率高，易早心抗原与抗．HCV联合检测试剂，做相关的实验和比 期出现肝硬化、肝癌，据世界卫生组织统计，全球 较，对其进行初步评价。 HCV的感染率约为3％，估计约1．7亿人感染了 材料与方法 HCV，我国HCV感染率为2．5％一4．6％。目前尚无 有效的丙型肝炎疫苗可利用。因此，尽早检出HCV 感染，及时有效阻断HCV的传播是非常重要的。目站及湖南君山单采血浆站181份ALT阳性疑似 前，丙犁肝炎检测技术主要有抗·HCV检测、HCVHCV感染的血清样本。 RNA核酸扩增检测、HCV核心抗原的检测3种类2．试剂与仪器：抗一HCV抗体检测采用北京万泰 型。但三者都存在着一定的局限性。联合检测HCV生物药业股份有限公司生产的ELISA法丙型肝炎抗 核心抗原和抗．HCV抗体的ELISA法检测试剂必将体检测试剂盒(以下简称：Anti—HCV检测试剂)， 成为HCV筛查试剂盒和血清学检测的发展方向。HCV核心抗原检测采用湖南景达制药有限公司生 作者单位：414000湖南岳阳市中心血站(吴斌)；湖南康润药业有限公司(吴喇强、段艳平、冯惊涛、欧兰香、胡道奇、任三莲)；湖南理工 学院(聂东宋) 产的ELISA法丙型肝炎核心抗原检测试剂盒(以下 简称：HCV．cAg检测试剂)。 总数的22．1％。 3．HCV抗原的制备：HCV抗原包括NS3．C．NS4． NS5，以包涵体形式表达，通过SP．SepharoseFF或Q． 和抗-HCV联合检测试剂检出阳性140份，占样本 SepharoseFF离子交换层析进行纯化，将所收集的洗 G 脱峰再用Sephadex50柱凝胶过滤，SDS．PAGE鉴抗·HCV阴性而抗-HCV阳性的样本联检试剂盒均 定抗原蛋白。 4．抗·HCV核心抗原单克隆抗体的制备：用阴性而抗-HCV阳性的样本联检试剂盒均能