NS-398抑制SKOV3细胞恶性生物学特性的机制.pdfVIP

· 1210 · 安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Sep；49(9) NS．398抑制SKOV3细胞恶性生物学特性的机制 赵婷婷 ，凌 斌 ，冯定庆 ，申 震 ，周 颖 摘要 目的 探讨环氧合酶2(COX2)抑制剂NS一398对卵 选择性的COX2抑制剂，可以穿透细胞膜，特异性地 巢癌细胞恶性生物学特性的影响。方法 以卵巢癌细胞株 抑制细胞内COX2的活性。该研究探讨 COX2抑制 SKOV3为研究对象 ，根据 NS-398的处理分为对照组 、实验 剂对 SKOV3细胞恶性生物学特性的影响。 组。利用MTS法和免疫组化法检测Ki-67蛋 白表达，从而监 测NS．398对SKOV3细胞增殖的影响；采用划痕实验和侵袭 1 材料与方法 实验分别观察细胞迁移和侵袭能力的变化，采用RT—PCR法 1．1 细胞株及细胞培养 人卵巢癌 SKOV3细胞株 检测基质金属蛋白酶 (MMP)mRNA的表达情况；采用实时 购 自中国科学院上海细胞所。在含 10％FBS的Mc— 荧光定量 PCR及 Westernblot检测上皮问质转化 (EMT)相 Coys5A培养基 中，37℃、5％ CO 相对湿度 为 关分子表达情况。结果 ① MTS增殖实验表明NS-398对 SKOV3细胞增殖作用无影响，免疫组化结果与之一致；② 划 95％的培养箱中培养。待细胞融合达90％时传代。 痕实验和侵袭实验分别显示，NS-398显著下调 SKOV3细胞 1．2 实验试剂 NS．398购 自中国碧云天生物技术 的迁移和侵袭能力，差异有统计学意义(P0．05)。RT-PCR 公司；FBS和 McCoyS5A培养基购 自美国GIBCO 检测结果表明NS一398抑制 MMP的mRNA表达；③ Western 公司；胰蛋 白酶 (1：250)购 自美 国AMRESCO公司； blot结果表明NS一398上调 SKOV3细胞 E—cadhefin的表达， COX2抗体购 自中国北京 Bioss公司；E—cadherin抗 下调Vimentin、Slug、Snail的表达。结论 COX2抑制剂通过 体和Vimentin抗体购 自美国SantaCruz公司；GAP— 阻止 MMP的表达和 EMT的发生，从而下调 SKOV3细胞的 DH抗体和Snail(L70G2)抗体购 自美国Cellsigna- 迁移、侵袭能力。 ling公司；Slug抗体购 自英国Abcam公司。 关键词 卵巢上皮癌；NS-398；迁移；侵袭 1．3 细胞增殖实验 采用 MTS法，取对数生长期 中图分类号 R737．33 细胞以1000个／孔的密度接种至96孔培养板，待 文献标志码 A 文章编号 1000—1492(2014)09—1210—04 细胞贴壁，分别加入NS．398(10p~mol／L)、DMSO处 理，分为：对照组、NS．398组、DMSO组。对照组用 肿瘤的恶性生物学行为主要包括三方面：增殖、 溶媒处理，每组设 3个复孔。于处理后 24、48、72、 迁移、侵袭。迁移和侵袭是卵巢癌相关进展过程中 96h加MTS工作液，1h后490nm波长处检测各组 最致命的事件，其分子机制是癌细胞从原位向远处 吸光度(OD值)。 转移时，首先过度表达基质金属蛋 白酶(matrixmet．