纳米阳离子多聚物在基因载体系统的应用.pdfVIP

高 分 子 通 报 2005年10月 纳米阳离子多聚物在基因载体系统的应用 郭 毅，张爽男，康春生，常 津。 (天津大学材料科学与工程学院纳米生物技术研究所，天津300072) 摘要：阳离子多聚物能与DNA通过静电吸附作用而自组装成纳米微粒，防止DNA被核酸酶降解。阳离子 多聚物由于具备合成简便、储存稳定、基因荷载率高、靶向性强、免疫原性低等优点而被用作基因载体。阳离子 多聚物按特性可分为两类：合成型和天然型。经典的人工合成型阳离子多聚物基因载体主要有：多聚乙烯亚 胺、多聚左旋赖氨酸和树状大分子等；天然生物型阳离子多聚物基因载体主要有壳聚糖及其衍生物和明胶等。 本文详细论述了各种阳离子聚合物用作基因载体的性能特点、自身缺陷、介导基因进入细胞的机理和靶向性策 略，并对非病毒基因载体的发展作出展望。 关键词：聚阳离子载体；纳米微粒；基因治疗；多聚复合体 引言 目前，应用于基因治疗的载体主要有病毒载体和非病毒载体两种。病毒载体转染效率高，但存在免 疫原性高、毒性大、目的基因容量小、靶向特异性差、制备较复杂及费用较高等缺点，因此人们愈来愈重视 非病毒载体的研究。非病毒载体安全性好，但存在转染、整合效率低等缺点。常用的非病毒载体包括裸 DNA(nakedDNA)、脂质体载体及阳离子多聚物载体等…。与脂质体及其它非病毒载体相比，阳离子多聚 物载体比较稳定，结构灵活，易调整其分子量、聚合物合成、多聚物形状(线形、星形、无规网状、嵌段、接枝 等)，可以通过引入侧链和特异靶向性基团来修饰多聚物骨架，进而调整和改善载体的性能，因此阳离子 多聚物载体具有较大的发展空间，引起材料学家的广泛关注，成为研究的热点。 根据多聚物的生物特性，可将阳离子多聚物基因载体分成人工合成型和生物型。常见的人工合成型 衍生物和明胶等。 1 纳米阳离子多聚物基因载体系统 阳离子聚合物结构上的一个共同特点是分子内含有许多氨基，在生理pH下会发生质子化，这些质子 化的氨基可以与DNA的磷酸基团的负电荷之间的静电吸附作用而发生电性中和，使DNA自组装成稳定 子，并可防止大的复合物在短时间内沉淀，进而提高转染效率。此外，复合物大小约50～500nm，带正电 荷，可与细胞表面带负电荷的受体结合，因此能有效被细胞内吞摄入介导基因转移旧。。 然而阳离子多聚物／DNA复合物纳米微粒进入体内后，在达到靶细胞的过程中需要克服许多障碍，如 J。因此，对阳离子多聚物／DNA复合物纳米微 调理素(血清抗体、补体)、吞噬系统、胞外基质、降解酶等b 粒表面要接上细胞表面特异表达的受体来解决靶向性问题，使复合物能穿越重重障碍，安全无损到达靶 细胞¨J。运载系统到达靶细胞后，首先遇到的是胞膜，其亲疏性、通透情况直接影响载体进入胞内。如果 通过胞吞作用进入内吞小泡后，则会受到内吞小泡中酶的降解或进入溶酶体腔室中被降解，为促使DNA 基金项目：国家自然科学基金；天津市应用基础研究重点基金(05YFJZJC01001)； 作者简介：郭毅，25岁，男，硕士研究生，从事载药及基因纳米微粒的研究； *联系人Tel：022 E—mail：jinchang@tju．edu．cn 万方数据 第5期 高 分 子 通 报 从内吞小泡和溶酶体中释放，可加入溶酶体抑制剂如氯喹或利用非病毒本身的特点如采用有侧链的阳离 子多聚物如PEI和星状树突体等来破坏内吞小泡膜以释放其中的DNA；也可以利用病毒或病毒蛋白、细 菌蛋白、短肽等。DNA转运对于许多非病毒介导的转染来说都是一个限速步骤，可以通过共价偶联上靶 向基因及富含赖氨酸和精氨酸的核定位信号(NLS)序列，便于复合物进入核中进行转录，从而提高转染效 源质粒，通过转铁蛋白受体，成功将外源基因导人造血细胞。 而对于聚阳离子载体的毒性机制目前主要有两种代表性的观点，其一认为毒性的产生主要是阳离子 聚合物的正离子与细胞膜的相互作用而对细胞产生损伤或引起细胞的凝聚，另外一种则认为阳离子聚合 物进入细胞后激活细胞内信号转导系统导致的。Fischer等旧1对聚合物进行了体外细胞毒性试验