凋亡抑制蛋白XIAP基因对A549细胞凋亡和化疗敏感性的影响.pdfVIP

维普资讯 中国肺癌杂志2008年6月第 11卷第3期 ChinJLungCancer，June2008，Vo1．11，No．3 · 基 础 研 究 · 凋亡抑制蛋白XIAP基因对A549~．E]胞 凋亡和化疗敏感性的影响 陈复辉 曲宏岩 隋广杰 【摘要】背景与目的 x连锁凋亡抑制蛋白 (x—linkedinhibitorofapoptosisprotein，X1AP)是新发现的一个IAP家 族中的主要成员，是IAP家族中最强的凋亡抑制因子，它可直接抑制caspases并可多途径调节细胞凋亡。XIAP基因在 大多数 的肿瘤细胞株中过表达 ，其表达与肿瘤 的进展、复发、预后以及肿瘤化疗的耐药密切相关 。研究通过RNAi方 法下调非小细胞肺癌 (NSCLC)细胞NIC—A549的XIAP基因表达后 ，研究XIAPsiRNA特异序列在NSCLC细胞凋亡和化 疗敏感性方面的作用。方法 应用半定量RT—PCR法检~A549细胞中XIAPmRNA基因的表达，设计并构建XIAP干扰性 dxRNA(smallinterferingRNA，siRNA)序列的表达载体，转染siRNA载体至A549中。荧光纤维镜确定转染效率，MTY 法测定细胞增殖率及化疗药物对细胞杀伤率，流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果 酶切和DNA~Jt序证实XIAPsiRNA构 建成功 。荧光纤维镜显示阳性转染组及阴性转染组的细胞转染效率无差异 。半定量RT—PCR法示阳性转染组较阴性转 染组、未转染组细胞XIAPmRNA表达明显降低 ；与对照组相比，顺铂对阳性转染组XIAPmRNA表达的抑制作用明显 增强、阳性转染组细胞增殖在24h、48h、72h、96h明显受抑制 ；细胞杀伤率、凋亡率明显增加 。结论 X1AP基因 在NSCLC中表达增高，可抑$~NSCLC细胞凋亡 ，导致NSCLC化疗耐药。XIAPsiRNA序列可特异性地抑制NSCLC细胞 增长，下调XIAP基因的表达，促进细胞凋亡，：L~JIINSCLC化疗敏感性。XIAPsiRNA序列有可能成为NSCLC治疗的靶 标。 【关键词】肺肿瘤 XIAP RNA干涉 【中图分类号】R734．2 DOI：10．3779~．issn．1009—3419．2008．03．027 EffectsofapoptosisproteinXIAPinhibitorontheapoptosisand sensitivity ofchemotherapyinA549cell CHENFuhui。，QUHongyan，SUIGuangjie Departmento~RespiratoryMedicine, eSecondClinicalCollegeofHarbinMedical University,Harbin150086,China； #DepartmentofGeneral Surgery 刀je 西 ClinicalCollegeofHarbinMedical University,Harbin150040,China； , DepartmentofMedicalOncology, eThirdClinicalCollegeofHrabinMedicalUn