大肠杆菌和枯草芽孢杆菌来源γ-谷氨酰转肽酶的克隆表达和性质比较.pdfVIP

第 28卷第 2期 高 校 化 学 工 程 学 报 No．2 Vb1．28 2014 年 4月 JournalofChemicalEngineeringofChineseUniversities hpr． 2014 文章编号：1003—9015(2014)02—0282—08 大肠杆菌和枯草芽孢杆菌来源 丫一谷氨酰转肽酶的克隆表达和性质比较 房 鑫， 田思思，姚 忠，王浩绮，周 治，熊 强，孙 芸，韦 萍 (南京工业大学 食品与轻工学院，江苏 南京 211816) 摘 要：Y．谷氨酰转肽酶(GGT)是生物体 内谷氨酰循环的关键酶，在生物有机合成领域具有重要的应用价值 。今建立了 大肠杆菌和枯草芽孢杆菌GGT的克隆、重组及诱导表达方法。在此基础上，分别考察了重组大肠杆菌GGT(rEGGT) 和重组枯草芽孢杆菌GGT(rB GGT)的催化特性和稳定性。结果表明，rEGGT对供体对硝基苯胺(GpNA)的亲和力( ) 优于rBGGT，但rB GGT的催化常数( )高达 3．48x10S一，是rEGGT的2O倍。稳定性研究表明，rEGGT在 pH6-9 — 和T45℃条件下的稳定性明显优于rB GGT：但当温度超过 45℃时，rBGGT的稳定性更佳。通过对 rEGGT和rB— GGT 的氨基酸组成及其大、小亚基界面相互作用力的分析表明，rEGGT大小亚基间疏水键 的数 目明显多于rB GGT，有助 于稳定其四级结构，使其在中低温下具有 良好的稳定性；而rB GGT氨基酸组成中荷电残基和芳香族残基的比例较高， 可有效维持其二级结构的稳定性。 关键词：Y．谷氨酰转肽酶；重组；热失活；反应动力学：稳定性 中图分类号：Q557 文献标识码：A DOI：10．3969~．issn．1003—9015．2014．02．014 Cloning，ExpressionandCharacterizationoft-glutamyltranspeptidasefrom EscherichiacoliandBacillussubtilis FANGXin， TIAN Si-si， YAO Zhong， WANG Hao—qi， ZHOU Zhi， XIONGQiang， SUNYun， WEIPing (CollegeofFoodScienceandLightIndustry,NanjingUniversityofTechnology,Nanjing211816，China) Abstract： Theenzyme7-glutamyltranspeptidaseisthekeyenzymeinvolvedinglutathionemetabolism，and haswideapplicationsinbiocatalysis．InthisPaper’theGGTsfrom EscherichiacoliandBacillus．subtiliswere cloned．recombinedandexpressed．ThecatalyticpropertiesandstabilitiesoftherecombinedGGTsfrom E．colf (rE—GGT)andB．subtilis(rB—GGT)wereinvestigated，respectively．Theresultsshowthat，althoughtheaffiniyt ofrE_GGTtowardGpNA( )ishigherthanhtatofrB_GGT’the