第一节 基因工程的步骤.pptVIP

第二节 基因工程的步骤 1、基因工程的基本工具 （1）“分子手术刀”--- 。 ①来源：主要是从 生物中分离纯化出来的 ②功能：能够识别双链DNA分子的某种 的 序列，并且切割特定的两个脱氧核苷酸之间的 断裂，形成黏性末端。 2、“分子缝合针”----- 。 ①功能：缝合两个脱氧核苷酸之间的 。 ②与DNA聚合酶作用的异同： 。 3、“分子运输车”---- 。 最常用的载体是： 。必须具备的条件： 4、目的基因的获取方法： 。 5、将目的基因导入植物细胞，最常用的方法是 ，其次还有 和 。 受体细胞可以是受精卵、体细胞（经组织培养成为完整个体）。将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 。此方法的受体细胞多是 。 通过DNA重组技术使原有基因得以改造的动物称为转基因动物。运用这一技术使羊奶中含有人体蛋白质，下图表示了这一技术的基本过程，在该工程中所用的基因“剪刀”能识别的序列和切点是一G↓GATCC一，请回答： （1）从羊染色体中“剪下羊蛋白质基因的酶是 。人体蛋白质基因“插入”后连接在羊体细胞染色体中时需要的酶是 。 （2）请画出质粒被切割形成黏性末端的过程图。 （3）人体蛋白质基因之所以能“插入”到羊的染色体内，原因是 ，“插入”时常用的工具是 。 检测 3.为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 ⑴获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的 处，DNA连接酶作用于 处。（填“a”或“b”） ⑵将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和 法。 （3）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的 做探针进行分子杂交检测，又要用 方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性 * 复习回顾 如图为DNA分子的切割和连接过程： （1）EcoRl是一种??? 酶，其识别序列是??????? ???，切割点是??? ?与??? ??之间的?? ?????? ???键。切割结果产生的DNA片段末端形式为??????????? 。 （2）不同来源DNA片段结合，在这里需要的酶应是????????????????????连 接酶，此酶是通过在????? ??? ??与?? ? ???????之间形成???????? ???键，而起“缝合”作用的。 限制酶 GAATTC 鸟嘌呤脱氧核苷酸 腺嘌吟脱氧核苷酸 磷酸二酯键 黏性末端 DNA 鸟嘌呤脱氧核苷酸 腺嘌吟脱氧核苷酸 磷酸二酯键 限制性内切酶 DNA连接酶 用限制酶切割 —C CTAG﹐G— —G GATCC— —CCTAG G— 有互补的碱基序列 细菌质粒或病毒 32P标记的DNA分子探针 杂交 放射自显影法 DNA杂交直接鉴定 基因工程的一般程序 一、目的基因的获得 二、重组载体的构建 三、重组载体的导入和筛选 四、目的基因的表达与鉴定 一、目的基因的获得 直接分离法 （最常用的方法——鸟枪法） 人工合成法 化学合成法 反转录法法 外源DNA DNA片段 目的基因 多个目的基因 信使RNA DNA单链 双链DNA 多个目的基因 多个目的基因 蛋白质氨基酸序列 目的基因核苷酸序列 目的基因 二、重组载体的构建 基因表达载体的组成： b、目的基因 a、启动子 c、终止子 d、标记基因 e、复制原点 提醒 ①与载体相比较,增加启动子、目的基因和终止子三个基因片段,其功能各不相同。 ②启动子(DNA片段)≠起始密码子(RNA);终止子(DNA片段)≠终止密