坏死梭杆菌白细胞毒素基因的BSBSE片段的原核表达及抗血清制备.pdfVIP

第 30卷 第 11期 中 国 预 防 兽 医 学 报 VO1．30．No．11 2008年 11月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Nov． 2008 坏死梭杆菌白细胞毒素基因的BSBSE片段 的原核表达及抗血清制备 张秀华，陈立志 ，赵利芳，刘晓颖，路 伟 (中国农业科学院特产研究所，吉林左家 132109) 摘 要：本研究以国内分离的牛源坏死梭杆菌F4基因组DNA为模板，应用PCR方法扩增BSBSE片段，克 隆到pMD18一T载体上，鉴定并测序正确后，构建pET32a．BSBSE表达质粒，转化 E．co／iBL21(DE3)~ IPTG诱导、 SDS—PAGE检测重组蛋 白表达、Westernblot检测重组蛋 白反应原性 。以该重组蛋白免疫兔制备抗血清 ，经间接 ELISA检测抗血清效价。结果表明，PCR扩增得到 1100bp的BSBSE片段，以此片段构建了pET32a．BSBSE表 达质粒，经诱导后获得了目的蛋白表达，以Westernblot检测该重组蛋 白证明为本研究的 目的蛋 白，并且与抗体 具有反应原性。以间接ELISA检测该重组蛋白免疫兔制备的抗血清效价达 10。研究结果将为坏死梭杆菌毒力因 子(1kt)的深入研究奠定了物质基础。 关键词：坏死梭杆菌；lkt；BSBSE；表达 中图分类号：$852．615 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008—0589(2008)l1-0906．05 ExpressionofleukotoxinBSBSEgene ofFusobacterium necrophorum ZHANG Xiu—hua，CHEN Li—zhi，ZHAO Li—fang，LIU Xiao—ying，LU W ei (InstituteofEconomicalWildAnimalandPlantResearch，CAAS，Zuojia132109，China) Abstract：BSBSEgeneoflktwasamplifiedbyPCR from theF4genomeofbovineoriginFusobacterium necrophorum and clonedtohtepET32toconstructpET32a—BSBSE，whichwasthentransformedintoE．coliBL21(DE3)forexpressionunder1PTG induction．SDS·PAGE andW estern blotassaysshowedthathteexpressed BSBSE had srtongimmunogenecity againstrabbit antiserum．Thisstudywouldbeusefulofrfurtherinvestigationoflktbeingamajorvirulencefactor． Keywords：Fusobacterium necrophorum；leukotoxin；BSBSE；expression 坏死梭杆菌(Fusobacteriumnecrophomm，Fn)是 低 7％；在国内，坏死梭杆菌引起的牛腐蹄病发病 革兰氏阴性、严格厌氧的多形态细菌，是人和动物 率在 10％～30％3【]，该病严重影响奶牛的生产性能， 消化道的常在菌 l【_。它所诱发的牛坏死杆菌病呈世界 是危害养牛业的重要传染病之一，给养牛业带来巨 性分布，在美国，由坏死梭杆菌引起的牛肝脓肿每 大的经济损失。 年在 300万例，舍饲牛肝脓肿发病率在 25％～30％， 坏死梭杆菌的主要毒力因子是白细胞毒素(Leu． 直接经济损失超过 1500万美元[2]，研究证实，肝脓 kotoxin，l