第十章_发酵放大.pptVIP

第十章 新产品/工艺的发酵产业化 过程： 实用知识 实用知识 EDMF（欧洲药物管理档案 ）申请提供材料：菌种基因测序，产品四大图谱、稳定性试验等，0.5、1.0g样品（连续三批总30g左右）及全检报告单；小试、中试、生产连续三批的批报（生产指示书/记录书），工艺、设备流程等。 FDA认证（美国）：特别重视生产程序文件的记录与管理---质量控制体系的完善程度，产品质量受控，非常重视原始记录、现场检查。（设备清洗验证、原材料质量） 国内药品注册申请：按要求项递交文件。 实用知识 GMP：药品生产质量管理规范。中国，2010年新版。 cGMP（Current Good Manufacture Practices）：动态药品生产管理规范。1999年，欧盟和美国达成原料药的cGMP互认协议，相互承认的cGMP认证结果。 SOP：（Standard Operation Procedure）：标准作业程序，又称：质量管理标准操作规程。包括：工艺规程、生产技术标准书、生产指示书、记录书、异常处理SOP等。 国外：文件化管理。 第一节 小试（实验室研究） 一、小试设备： 生化培养箱、摇床/摇瓶柜、小型发酵罐。 1、摇瓶机： 往复式：80-120rpm，冲程80-120mm；用于培养细菌、酵母等单细胞菌体； 旋转式：60-300rpm，偏心距30-60mm。传氧速率好、培养液不会溅瓶口。（普遍采用） 生产厂家： 上海智城，ZHWY-2112B型，（偏心距Φ35）； 乐山长征制药机械有限公司、江苏太仓实验设备厂等。 2、小发酵罐 10L以下罐：玻璃罐较多，大多2层搅拌，六平叶，一般最大600rpm，环形空气分布管。 30-150L罐：罐材质316L，3层搅拌，六平叶/弯叶，一般最大500-550rpm，空气分布器：直管。 都配有DO、pH、T、泡沫等传感器。 （可直接检测控制温度、搅拌转速、通气流量、罐压、消泡、 pH、DO、发酵液体积、补料量、排气 CO2 和 O2 等十多个在线参数） 常用四联、六联发酵罐（10-20-50L） 生产厂：德国贝朗（B.Braun）、瑞士INFORS、美国NBS；镇江东方生工、上海国强等。 5L以下罐：种子制备和适应性试验； 30-150L罐：小试放大，确定工艺参数。 小试发酵罐 二、摇瓶发酵试验 三角瓶（敞口）：装量10-20%，配上纱布棉塞，接种量3-10%。 摇瓶发酵：灭菌接种、培养，测定参数、产物量。 （有限空间、人力、财力，普遍采用） 注意： 1、通气效果：用8、10层纱布； 2、蒸发量：周期长，菌浓高，可考虑稀配方、偏大体积、补水（=蒸发量）； 3、装量：装量越大，比表面积越小，氧传递速率就越小； 4、实际运行不要丢转，常检查； 5、培养过程不能停机，影响极大，万一停机，不要超半分钟。 三、小试需确定的工艺： 菌种保藏方法，斜面、摇瓶种子、摇瓶发酵培养基的组成及配比，培养温湿度，接种量，种龄/发酵周期等， 最佳M配比确定：正交设计、均匀设计、响应面法。 -------小试只是初步工艺数据。 四、摇瓶与罐培养的差异 1、KLa和DO的差异： 罐上KLa大于摇瓶，对于好氧菌株，罐上发酵单位一般比摇瓶高。 2、CO2浓度的差异： 受通气、罐压影响，罐上CO2浓度明显大于摇瓶。 3、机械损伤的差异： 罐上搅拌剪切损伤远远大于摇瓶。 第二节 中试及试生产放大 目的：小试试验成果在生产规模上重现。 小试、中试到生产的过程，称为放大（scale up）。 （30-150L → 1-5m3 → 15-300m3） 小设备、大设备的环境条件分析（尽量一致）： 化学因素：基质、前体浓度等，人为控制可保持恒定； 物理因素：温度、菌浓、粘度、压力、功率消耗、剪切等。 有差异 一、发酵罐规模改变的影响： 几何相似、不同规模的发酵罐对比，改变的主要因素有： 分批灭菌M破坏 释放总热量增加 菌体繁殖代数、M灭菌、通气搅拌、热传递、接种体积。 工程菌：10KL明显下降 溶氧更好、 二、放大的理论基础： 假定：罐几何相似，全档板条件，M成分和发酵液物理性质相同。 1、常用的放大参数： KLa、P/V ----（结合代谢