微生物的鉴定思路.docVIP

关于微生物的鉴定 革兰氏染色 初步分类 非苛养菌鉴定 苛养菌鉴定 真菌的鉴定 革兰氏染色 [原理]革兰氏染色目前有三种观点：等电点学说、化学学说和渗透学说。 [标本处理]1.有菌部位的标本，如痰液、粪便、各种拭子、创面等可直接涂片。 2.无菌部位的标本，如脑脊液、胸水、腹水、胆汁、尿液、关节液等，应取适量标本（最高可达5-7ml）,经3000rpm 离心10min.，取沉渣涂片染色。 [报告方式]：革兰氏染色：检出G+球菌 ；G-球菌 ;检出G+杆菌 ；G-性杆菌 革兰氏染色 [注意事项] 1．标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。 2．玻片通过火焰温度不能太高。 3．若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不在出现紫色为止。 [临床意义]通过革兰氏染色，将细菌分初步为革兰氏阳性和革兰氏阴性，便于临床治疗 细菌的初步分类 1、 细菌的分离与纯化：自血平板挑出待检菌株的单菌落进行初步的鉴定。如果混有杂菌，应该重新转种分纯。 2、 染色与镜检： 首先通过革兰氏染色确定基本的分类：（1）G+球菌（2）G-球菌（3）G-杆菌（4）G+杆菌。此外，如果镜下发现革兰氏染色阳性、椭圆形、有芽孢状的较大菌体，可能是真菌。 临床标本中分离出较多的是G-杆菌中的肠杆菌、非发酵菌和G+球菌中的葡萄球菌、链球菌、肠球菌。G-球菌中的奈瑟氏菌亦常分离出，尤其在泌尿生殖系统标本中常见。 细菌的初步分类 1.触酶试验 主要用于G+球菌的分类。葡萄球菌属：触酶（+）链球菌属及肠球菌：触酶（-） 2.氧化发酵试验（O-F试验） 根据细菌在无氧环境中能否利用碳源将细菌分为非发酵菌（氧化型或产碱型）和发酵菌（兼性厌氧菌）。G（-）杆菌中的肠杆菌O-F试验阳性，非发酵菌O-F试验阴性 3.氧化酶试验 主要用于G-杆菌的分类。肠杆菌的氧化酶（-），非发酵菌多数氧化酶（+），但嗜麦芽窄食单胞菌和不动杆菌的氧化酶（-）。 非苛养菌的鉴定 主要有G+球菌、G+杆菌、G-球菌和G-杆菌 这些细菌培养的条件不苛刻，这也是标本分离常见的细菌 苛养菌的鉴定也相对比较简单，只要根据初步的分类，遵循其鉴定的途径，就可以做出完整的鉴定结果 G+球菌的鉴定途径 1.首先根据菌落特点和革兰氏染色判断是否为G+球菌。 2.根据触酶结果判断为葡萄球菌or链球菌（肠球菌） （+） 葡萄球菌 菌落特点和G染色G+C 触酶（—） 链球菌和肠球菌 葡萄球菌的鉴定 1.对于葡萄球菌的鉴定首先根据G染色和触酶实验确定 2.根据菌落特点、是否溶血及特点，初步判断是否需要做Co+：金黄色葡萄球菌 Co实验—：其他葡萄球菌 系列生化结果判断葡萄球菌到种 NOTE：对于所有葡萄球菌都要判断其是否为MRS，以指导临床用药。 链球菌的鉴定 首先根据G染色和触酶结果确定为链球菌，然后再根据细菌的溶血情况和菌落特点判断鉴定途径 G+C 触酶（—） 溶血性 α溶血 β溶血 γ溶血 Optochin 杆菌肽 cAMP 胆七 胆七 R S S S S + -- 胆七 肺链 A群链球菌 B群链球菌 D群链球菌 D群链球菌 草绿色 6.5%NaCl -- + 非肠球菌 肠球菌 肠球菌的鉴定 根据G染色和触酶初