组织切片技术.pptVIP

组织学切片技术 大多数的生物材料，在自然状态下是不适合显微观察的，也无法看到其内部结构。因为材料较厚，光线不易透过，另外由于细胞内各个结构的折射率相差很小，即使光线可透过，也难以辩明。 组织学技术是教学和科研中常用的方法。组织在经过固定，脱水，透明，包埋等手续后，用切片机切成较薄的切片，再经不同的染色就可以显示不同细胞组织的形态及其中某些化学成份含量的变化，组织切片也便于保存。 组织学标本的制作技术是组织学，胚胎学，生物学、病理学、肿瘤学、法医学及临床诊断学等学科研究观察细胞、组织的生理、病理形态变化的一种主要手段。 一、概 述 组织学技术包括： 组织学制片技术 组织化学技术 荧光组化及免疫组化技术 各种特殊显微技术 电镜组织学技术 组织培养技术等 二、组织学制片技术的分类 组织学制片技术有很多不同的制片方法，一般可分为切片法与非切片法两大类： 切片法：石蜡切片、火棉胶切片、冰冻切片等。 非切片法：铺片、涂片、压片、磨片、整装片等。 即不用切片机，不经切片手续而制成切片的方法，根据材料性质的不同，有不同的处理方法，该类方法操作简单快捷，其中铺片法，封藏法可使原有组织结构不被破坏，涂片法，压片法弥补了用包埋，切片法所不可能观察清楚的不足，因此是组织标本制备中常用的手段。 1.1 涂片法 主要用于血液、精液、尿液、痰液、微生物等不能切片的液态颗粒性材料，可在载玻片上涂成单层细胞，再经固定，脱水，染色等手段制成永久标本。 1.2 铺片法 主要用于动、植物组织的表皮层观察，可活体取待观察组织，用尖镊子迅速将组织平铺在载玻片上。如: 疏松结缔组织铺片标本的制备。 1.3 压片法 一些较幼嫩，柔软的材料可将其置载玻片上，用小解剖刀将其分散，加染料一滴，再盖上盖玻片，用拇指垂直用力挤压，使组织散成一薄片，再进行观察，如骨骼肌运动终版的制备。 1.4 磨片 Ground section 用于很坚硬的组织，如骨和牙。 2、切片法 切片法是必须依靠切片机将组织切成薄片来进行观察的方法。为了能清晰地观察到组织结构及细胞形态，必须先经过一系列步骤将组织内渗入某些支持物质，使组织变硬以利于切成薄片，根据所用支持剂的种类不同，主要分为石蜡切片法，火棉胶切法，冰冻切片法等类型，切成薄片后还需要脱蜡，染色，脱水，透明等步骤，将其制成永久标本。 石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。现以石蜡切片为例，介绍切片标本的制备方法。 组织学制片步骤： 取材 固定 冲洗 脱水 透明 浸蜡 包埋 修块 切片 贴片 烤片 染色 封片 观察结果 2.1 取材 根据不同的实验目的，选择相应的材料，材料要求新鲜、准确、完整，材料要避免挤压、挫伤、干枯。 所采集材料应立即放入固定剂，并编号，注明采集时间、地点、名称、组织部位，所取组织块要大小适当，即要能说明问题，又要考虑固定剂的穿透能力。 一般组织学取材稍大，细胞学取材稍小，动物组织取材要稍大，植物组织取材稍小。 2.1.1 人体组织标本的取材 手术切除标本，各种活检穿刺标本和尸体解剖标本。 手术切除标本的取材： 病灶在组织中的分布常存在不均一性，取材要有代表性，取材部位要兼顾：主要病灶，病灶与正常组织交界处，远离病灶的正常组织。 组织大小：长1cm×宽1cm×厚0.2～0.3cm。 各种组织的活检取材： 活检取材体积小，取材困难，不易取到主要病灶，因此对标本的处理应特别慎重，及时固定，包埋时要平整。 2.1.2 动物组织标本的取材 动物的处死方式一般为活杀，组织标本来源较新鲜，10min内即可完成固定和冷冻保存，脑组织和神经组织应采用灌注固定后，再进行后固定。 动物的选择 动物的选择是组织切片取材的第一步,在组织学中以人的组织为理想，但人的组织不易得到，根据研究的需要，大都以动物的组织来代替。有些动物的组织器官比人的组织更为典型，如：猪的肝脏；豚鼠胰腺、内耳；猫的肋间肌显示运动终板；兔的皮下组织和肠系膜作活体染色较为理想等。 动物的处死 （1）吸入麻醉法：将浸透乙醚的棉花放入玻璃缸内,将 动物放入玻璃缸内,盖上玻璃盖，观察动物麻醉情况，放血处死，此法用于小动物。 （2）注射麻醉法：用3%戊巴比妥钠按每公斤体重1～2ml静 脉注射或腹腔注射，麻醉后立即放血处死，此法用于大动物。 （3）直接处死法：用金属器械猛击动物的后脑部或直接断头放血处死，此法适合于小动物。 2.1.3 组织取材注意事项 1.组织要求离体后30min内浸入固定液，尤其是开展分子生物学研究。动物放血处死后立即取材，最好在心脏还在跳动时立即取材，马上投入固定液中； 2.注意防止人为因素的影响 切取组织的刀剪必须锋利，刀要足够长。切分组织块时，不可来回切割。夹取组织时，镊子要轻，