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第 三 章 DNA多态性分析基础 人类DNA遗传标记----法医物证学应用研究的热点 ?由常量检材到微量检材 ----微量检材的检验 ?由蛋白质水平到DNA水平 ----陈旧检材的检验、取材的广泛性 ?实现了仅能否定到高概率肯定 ---提高了法庭证据的可靠性 人类DNA遗传标记----特定的座位上出现等位基因 ?出现在编码区或非编码区 ?表现为序列多态性或长度多态性 第一节 DNA分子结构与功能 一、DNA的分子结构 DNA是由4种核苷酸通过磷酸二酯键连接成的线性多聚体 1.DNA的基本结构单位 碱 基 A G C T 核 苷 核苷酸 2.DNA的分子结构 一级结构--DNA分子中核苷酸的排列顺序 链接方式 3’,5’磷酸二酯键连接 戊糖和磷酸构成多聚核苷酸对骨架 含氮碱基突出于骨架上 不对称末端 5’-自由的磷酸，3’-游离的羟基 生物学意义 1. 遗传信息的载体 2. 构成DNA遗传标记的结构基础 二级结构--两条DNA单链形成的双螺旋结构 双螺旋结构的特征 1. 两条单链逆向平行排列， 绕同一中心轴形成双螺旋 2. 两条单链间以氢键连接 碱基互补原则：A T,C G ** 稳定性与G+C含量呈正比 ** 嘌呤和嘧啶相等: A+G C+T 配对原则的意义 1.复制的分子学基础 遗传信息传给子代 2.转录的分子学基础 RNA合成的模板 –蛋白质 3.DNA多态性分析的分子学基础 DNA遗传多态性 三级结构---超级螺旋结构 结构特征 真核生物DNA三级结构--核小体 140bpDNA双链缠绕组蛋白8聚体 60bp的连接链（结合有组蛋白H1） 生物学意义 压缩DNA分子体积，有利于在细胞 中包装组蛋白对DNA分子完整性的 保护作用 统计数据 人类基因组DNA直线长2m 细胞核直径5um DNA分子被压缩了近一万倍 二、DNA的理化性质 DNA是生物大分子，因此具有高分子物质的一般性质 粘 性 较大 溶液的粘性与溶质分子的不对称性有关 两性电解质 DNA含有磷酸基团（-）和含氮碱基（+） ? 等电点低--中性或弱碱性溶液--带负电 电泳技术进行分离的分子基础 ? 可以与金属离子（Na,K,Mg.Mn）结合成盐 DNA+盐（乙醇或异丙醇）DNA沉淀析出 ? 可以和组氨酸结合 使DNA分子更具有稳定性 吸收紫外线 碱基含有共轭双链 最大吸收波长260nm ? 对DNA样品进行定量分析 1.DNA的变性 概念：在加热、溶液碱性、有机溶剂、二甲基亜砜、甲酰胺等条件 下，DNA双链间的氢键断裂，形成两条单链DNA分子的过程。 变化：溶液粘度降低,沉降速率增加,浮力密度上升,紫外线吸收增强 增色效应～随温度上升，DNA溶液的紫外线吸收增强，A260nm值 ? DNA对紫外线吸收强度与变性程度成正比 ? OD260值：双链DNA 单链DNA 单核苷酸 融链温度～随温度上升，一半DNA分子变性时的温度 Tm值 ? Tm值与DNA分子中G/C含量呈线性关系 估计DNA的GC含量 G+C % Tm—69.3 × 2.44 估算引物的Tm 值 Tm 4 G + C + 2 A + T ? Tm值受介质中离子强度的影响 在高离子强度溶液中相对稳定（1mol/L NaCl） 某些因素影响下→DNA分子共价键断裂→小片段DNA的过程：DNA降解 2.DNA的复性 概念：当撤除变性因素后，原变性的两条互补DNA单链通过基配对又重 新缔合成为双链结构的过程叫复性。 ** 加热后变性的DNA在温度降低过程中的复性有称为退火 影响：温度影响～最适为Tm以下25℃，过高不易复性；过低碱基错配 离子强度～足够盐浓度—中和DNA分子携带负电荷—利于复性 分子结构～简单序列的、小分子DNA--易发现互补序列-复性快 溶液浓度～高浓度DNA溶液较低浓度DNA溶液易复性 ** 影响复性过程的主要因素：复性温度与溶液的离子强度 杂交：在复性的条件下，来源不同、但具有碱基互补的DNA单链按碱基 配对原则形成双链DNA分子的过程称作杂交。 ** 局部碱基序列具有同源性的DNA分子也能形成局部杂交产物 杂交技术：在复性条件下，探针与靶DNA单链形成杂交双链 用以分析两核酸分子间的碱基互补程度 探 针：标记有失踪物的寡核苷酸片段 三、DNA的复制和基因表达 1.DNA的复制 概念：复制是指以原来的DNA为模 板合成相同DNA分子的过程 复制的基础--碱基互补原 方式：? 半保留复制 ? 半不连续 过程：复制的起始 双链解开 引物合成 DNA链延伸 5’-3’方向 DNA聚合酶 复制的终止 引物切除 缺口连接 DNA聚合酶--催化脱氧核苷三磷酸聚合成DNA链的酶 条 件：必须有引物、复