LacS基因原核表达载体构建及重组蛋白表达.pdfVIP

· 4 · 《上海畜牧兽 医通讯》 2010年第 4期 LacS基因原核表达载体构建及重组蛋 白表达 白 俊 张 东 刘羿羿 李 璐 杨 杰 周欢敏 (内蒙古农业大学动物遗传育种重点实验室 内蒙古 呼和浩特 010018) 摘【要】克隆得到硫矿硫化叶茵 中的糖苷酶基 因LacS，利用原核表达载体 pASK—IBA 2构建重组质粒 pASK 一 1BA一2 LacS，酶切和测序鉴定证 实LacS基因成功插入且基 因阅读框 正确 。重组质粒 pASK—IBA一2一LacS转 化大肠杆菌 Ro~eta，去 水四环素诱导后 ，菌液裂解 离心亲和层析 获得 重组 蛋 白，westernblot证 实LacS在 大肠杆 菌 Rosseta能高效表达。 关键词 ：LacS；克隆；原核表达载体 ；重组蛋 白 乳糖 lactose是哺乳 动物乳 汁中特有 的一种双糖 ，在 牛乳 于肠道 内缺乏所需的乳糖酶 ，或者是 由于乳糖酶的活性已减 中含乳糖为46％～4．7％，人乳 中含乳糖为 6％～8％。乳 弱而造成的。据估计 ，全球约 75％的成年人体内乳糖酶的活 糖不耐症 Lactoseintolerance是指人体不能分解并代谢乳糖 性有减弱的迹象。该症状发生 的概率在北欧约5％，而在一 (常见于牛奶及其他奶制品中)，饮用牛奶 等奶 类后乳糖不 能 些亚洲及非洲国家则超过 9O％。简单的说，乳糖不耐症就是 被分解吸收 ，乳糖进入结肠后 ，被肠道细菌分解 ，产生大量乳 缺乏乳糖酶或其活性不足所造成的状况，这种酶是用来消化 酸、甲酸等短链脂肪酸和氢气 ．造成渗透压升高 ，使肠腔 中的 水分增多，引起腹胀 、肠呜、肠绞痛直至腹泻等现象。这是 由 * 为通讯作者。 基金项 目：内蒙古 自然科学基金项 目。 2O 2．2．2 对体重和 日增重的影响 ：试 验结果表明，日粮能量 和 l8 粗蛋 白质水平对公母鸡期末 体重 和 日增重有 显著影响 (P 公鸡 l6 0．05)。低蛋 白质水平时 ，增加能量对增重不会产生促进作 l4 一一。母鸡 用 ，反而有一定的抑制作用 。能量和粗蛋 白质平衡对 日增重 一 12 影响显著(P0．05)，在各个阶段无论是低能组还是高能组， 10 只要有适宜的蛋能比，都能表现出较好的生长性能，但只有 磬 8 在最佳蛋能 比时 ，才能表现 出最佳 的阶段体重和 日增重 。 --7 — 6 2．2．3 料 肉比分析 ：结果显示 ，随着 日粮 能量 的提高 ，公母 4 鸡的料 肉比下降，但并不都是 以高能高蛋 白质组为最好 ，适 2 宜的能量与蛋白质平衡对料肉比影响显著 (P0．05)。营养 0 水平对料 肉比的影 响主要表现在快速生长期 。