结果与分析.docxVIP

3 结果与分析3.1 HCPT接枝PEI靶向基因载体的结果与分析3.1.1 材料的合成与表征的结果分析3.1.1.1 红外结果与分析产物的红外谱图如图3.1.1.1。图3.1.1.1 各种PEI聚合物的红外谱图。a：HCPT；b：HCPT-PEI；c：HCPT-PEI-FA；d：PEI-FA；e：FA从红外谱图上可以看出，HCPT和FA接枝在PEI上之后，因为PEI含有大量的N-H和C-H键，使得材料的红外吸收在3500～3300 cm-1处的N-H伸缩振动的吸收峰均有所增强，在2950 cm-1、2830cm-1处的C-H反对称和对称伸缩振动也都有所增强。由于接枝到PEI上，HCPT和FA含量大大下降，HCPT在1725cm-1处的酯中的C=O伸缩振动观察不到；HCPT环中一个酰胺键和FA中的两个酰胺键在1696cm-1的C=O伸缩振动，同HCPT和FA连接在PEI上生成的酰胺中的C=O伸缩振动（酰胺Ⅰ带）均红移至是1653cm-1处，同时重叠了HCPT、FA中的C=C、C=N伸缩振动吸收峰；结构中的两个仲酰胺（非环状结构内）的面内N-H弯曲振动（酰胺Ⅱ带）在1572cm-1处，同时重叠了HCPT上醇羟基的面内弯曲振动，再连接着亚甲基在1458cm-1处的面内弯曲振动吸收峰，使得吸收峰变得非常宽。观察指纹区的图谱，可以在B和C的1260cm-1、1125cm-1处分别观察到酯键C-O-C的不对称和对称伸缩振动。综上， HCPT和FA均成功接在了PEI上。3.1.1.2 1H NMR结果与分析产物的氢谱如图3.1.1.2a。图3.1.1.2a 各种PEI聚合物的1H NMR。a：PEI-FA；b：HCPT-PEI-FA；c：HCPT-PEIa中δ=9.00~6.67（如图中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ处）对应FA芳香环上的质子和生成酰胺键中的质子，δ=3.52~1.98（图中Ⅳ）对应PEI上的大量质子和FA上结构上的某几个质子，而FA中羧酸的羟基质子在高位处的化学位移值不见了，说明成功将FA接在了PEI上。c中δ=8.24~5.24对应HCPT芳香环上的质子、20-OH中的质子和生成酰胺键中的质子，δ=3.52~1.98（图中Ⅳ）对应PEI上的大量质子，而HCPT中10-OH的质子化学位移值（δ=10.34）也消失了，同时在δ=1.84，1.12和0.89处对应有丁二酸中亚甲基上的质子，说明成功将HCPT通过丁二酸连接在了PEI上。b中重叠了a和c的所有化学位移值，可以看出即含有对应FA芳环上的质子的化学位移值Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ，也含有HCPT芳环上的质子对应的化学位移值，同时也含有PEI上质子对应的化学位移值Ⅳ，说明成功合成了目的产物。其中根据上图中b曲线峰面积的积分可以计算出HCPT-PEI-FA材料中所含各结构的物质的量之比，如图3.1.1.2b。结果为HCPT：PEI单体：FA=1：122：0.96，进一步计算出材料中HCPT的质量分数为（1×364.35）/（1×364.35+44×122+0.96×441.4）=5.92%。 图3.1.1.2b HCPT-PEI-FA的1H NMR3.1.2 材料的粒径与Zeta电位的结果与分析在25℃下，PEI、PEI-FA、HCPT-PEI和HCPT-PEI-FA在水溶液中的粒径分布见图3.1.2.1，其分别与pMX-GFP质粒形成的复合物的粒径分布见图3.1.2.2，以上四种PEI聚合物及其与质粒结合后的平均直径和Zeta电位的结果见表3.1.2。PEI接枝水溶性的FA后，粒径有所增大；PEI接枝疏水性的HCPT后，自聚集成胶束，粒径有所减小；而HCPT-PEI-FA的自聚集能力是最好的，粒径也是最小的。各种PEI聚合物与粒径相对比较大的pMX-GFP质粒结合后的粒径达到了数百纳米。单纯PEI和PEI-FA在水中因分子中的氨基比较分散，电位较小；结合质粒后，质粒表面静电吸附了大量的氨基，测得为质粒表面聚集的高浓度氨基的电动电势。其他各种PEI聚合物分子因自聚集的影响，亲水性的氨基在外，测得依然为高浓度的氨基的电动电势；结合质粒后，氨基与质粒静电吸附，疏水性的基团在外，测得的电动电势较小。根据HCPT-PEI-FA加入质粒后Zeta电位的减少，说明与质粒发生了结合。图3.1.2.1 各种PEI聚合物在水中的粒径分布。a：PEI；b：PEI-FA；c：HCPT-PEI；d：HCPT-PEI-FA图3.1.2.2 各种PEI聚合物与质粒的复合物在水溶液中的粒径分布。e：PEI/DNA；f：PEI-FA/DNA；g：HCPT-PEI/DNA；h：HCPT-PEI-FA/DNA 表3.1.2 各种PEI聚合物及其与质粒的复合物在水中的平均直径与Zeta电位样品平均直径（nm）Mean Zeta Potentia