实验_紫外分光光度法测定蛋白质含量.pptVIP

分光光度法 分光光度法的原理 Lambert-Beer定律（光吸收定律） 溶液的质量浓度（C）越大，液层厚度（L）越厚，则溶液对光线吸收得越多。 当入射波长、液层厚度和溶液温度一定时（即K吸光系数为定值），溶液对光线的吸收与溶液中吸光物质的浓度成正比。 所以可通过测量溶液的吸光度来求得被测组分的含量。 入射光 I0 出射光 It 反射光 Ir Ia 吸收光 It／I0 ＝ T T （ transmittance ）称为透光度 ，表示透过光的强度是入射光强度的百分比。 A∝C 光密度与浓度成正比 T与C成反比，浓度愈大，T愈小 A= - lg = KCL T A （Absorbance）称为吸光度，指溶液对光线的吸收程度又称为光密度（Optical density， OD ）。 分光光度法的应用 用标准管法计算待测液浓度 在相同条件下测定已知浓度（CS）标准液的吸光度（AS），及未知浓度（CU）溶液的吸光度（AU），根据定律得：  AU=KUCULU ； AS=KSCSLS 因为KU=KS， LU=LS 所以AS与AU之比值也等于两浓度之比值