CDK抑制剂夫拉平度诱导人骨肉瘤MG63细胞凋亡和分化与研究.pdf

中文摘要 CDK抑制剂夫拉平度诱导人骨肉瘤MG63细胞凋亡和分化的 研究 研究生：李啸然 导师：李月白 郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 河南郑州450001 中文摘要 研究背景： 骨肉瘤(Osteosarcoma)是一种恶性程度很高的肿瘤，根据不同分级骨肉瘤 细胞的生物学特征推测，骨肉瘤的发生可能起源于骨髓基质干细胞向成骨细胞 分化以及成骨细胞终末分化的过程中。成骨细胞的终末分化是一个精密协调的 过程，需要关键的成骨特异性转录因子Runx2(cbfa)与I№蛋白协调共同介导整 个过程。通常低磷酸化的Rb蛋白通过限制细胞合成S期相关的蛋白质而阻止细 胞进入S期，Runx2通过识别成骨细胞特异性顺式作用元件(OSE)而启动成骨细 胞分化相关基因的转录，继而促进成骨细胞的分化。恶性肿瘤的主要生物学行 为是细胞周期脱调控，即无限增殖，这一过程需要周期蛋白激酶(CDK)和周期蛋 处于过表达或失去正常调控机制的状态，且CDK4等周期蛋白激酶可同时介导 Runx2蛋白的泛素化降解和Rb蛋白的磷酸化。因此，通过抑制CDK活性而恢 复Runx2等细胞分化的关键蛋白活性和生理状态将对逆转骨肉瘤的恶性表型使 其向终末分化方向发展是非常有利的，并可能导致肿瘤细胞周期阻滞和凋亡。 研究目的： 本课题拟以人骨肉瘤细胞系MG63为实验对象，观察不同浓度的CDK抑制 亡的作用机制；同时观察低浓度FP对细胞分化的诱导作用及可能的机制。 中文摘要 方法： 2．FCM 48h和72h，细胞周期的变化。 3．FCMAnnexin 作用24h和48h，细胞早期凋亡情况。 200riM和300nM的FP干预后，细胞分化相关基因的表达量的变化。 细胞内碱性磷酸酶(ALP)活力的改变。 FP干预后，I型胶原表达量的变化。 7．Western 后，细胞内CDK2和Runx2蛋白的表达。 结果： 260r蝴。 对照组明显下降(户0．01)，G2期较对照组显著上升伊O．01)。 3．AnnexinV／PI双荧光流式细胞术检测结果显示：24h各组早期凋亡率分别 导MG63细胞凋亡的作用，并在一定范围内浓度越大诱导凋亡作用越强。48h时 20．21+1．96％。单变量方差分析结果示：3组早期凋亡率有差异(F=50．519， II 中文摘要 显差异。 理后细胞后，ALP活性在ld一12d内均缓慢上升，其活性峰值时间出现在第12d， 组(P0．05)。 明显(尸O．05)。 明显上调Runx2和骨钙素(OCN)的mRNA表达量(尸0．05)。 7．Western (尸O．01)。 结论： 1．FP能有效的抑制MG63细胞的增殖，且呈浓度、时间依赖性，并可引起 细胞G2期阻滞，其中400nM浓度组作用明显并诱导细胞凋亡。 Rb的mRNA表达水平，且降低CD勉蛋白表达量。 I型胶原、OCN表达增强t上调成骨转录因子Runx2的mRNA及蛋白的表达量。 关键词：盐酸夫拉平度MG63凋亡分化CDK III Abstract The CDKinhibitor oninductionof of study Flavopiridol osteosarcomacelllineM【G63 anddifferentiation apoptosis LiXiaoran Postgraduate