CTLA-4+基因重组腺病毒的构建与其免疫活性的研究.pdfVIP

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2017-08-21 发布于安徽
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CTLA-4+基因重组腺病毒的构建与其免疫活性的研究.pdf

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CTLA-4 基因重组腺病毒的构建及其免疫活性的研究贾红宇卢安卫徐世国蒋建文浙江大学医学院附属第一医院肝胆胰外科（310003）目的：构建CTLA-4 基因重组腺病毒，为诱导移植免疫耐受疫苗的研究奠定基础。方法：将质粒pcDNA3.1-CTLA-4 经双酶切后得到CTLA-4 基因片段，测序后连接入腺病毒穿梭载体pshuttle-CMV 。穿梭载体pshuttle-CMV-CTLA-4 与含腺病毒基因组的辅助质粒BJ1583 经电转化至 AD293 细胞，在重组酶作用下进行重组，包装成重组腺病毒（AD/CTLA-4 ）颗粒，用PCR 、酶切方法及Westernblot 进行鉴定。并用动物免疫实验来检测该重组腺病毒的免疫活性。结果：从质粒pcDNA3.1-CTLA-4 中经双酶切后得到CTLA-4 基因片段，DNA 序列测定证实穿梭载体pshuttle-CMV-CTLA-4 构建正确。穿梭载体pshuttle-CMV-CTLA-4 与含腺病毒基因组的辅助质粒BJ1583 经电转化至AD293 细胞，出现明显细胞病变效应。收集重组腺病毒（AD/CTLA-4 ）， PCR 法、酶切法均证实该重组腺病毒含有 CTLA-4 基因，Westernblot 证实该重组腺病毒在 AD293 细胞中能表达 CTLA-4 基因。该重组腺病毒免疫小鼠不能激发小鼠的细胞免疫反应，证明该重组腺病毒具有诱导免疫耐受活性。结论：成功构建了CTLA-4 基因重组腺病毒，该重组腺病毒可诱导免疫耐受。 ) 2750 ALT L / 2500 I AST U ( 2250 s l e 2000 v e * l 1750 T S 1500 A d 1250 片 n a T 1000 # L 750 # A m 500 u r e 250 S 0 IR HB2 HB1 IB HR Fig 3 The effect of SH-VC bleeding on liver function in Part Ⅱ * # P0.05 ，P0.01 VS IR （±s ，n=5 ）.