Apo-B1OO介导的t-PA基因在鸡体内表达与其在卵黄中积淀的研究.pdfVIP

全国兽医病理学、动物病理生理学学术会议论文集 同疫苗毒株诱导的血清抗体，筛选适于贵州省使用的PRRS疫苗，通过母源抗体和免疫抗体的消长 规律，制定PRRSV的免疫程序。 研究结果：在调查的43个猪场中，37个猪场发生了高致病性PRRS，发病高峰季节这6～8月 份，发病猪品种主要有黔北黑猪、特种野猪和其它杂交猪等。发病猪群的血清抗体水平明显高于非 免疫临床健康猪群，而低于健康免疫猪群。分子流行病学研究发现，有3种Nsp2基因发生不同程度 缺失的PRRSV同时在贵州省流行，66．67％毒株90个核苷酸缺失，25％的毒株177个核苷酸缺失， 基因的遗传距离为0．000—0．007，在系统发生树上主要聚为2大类：贵州流行株与参考毒株之间基于 生关系接近，与早期流行毒株距离较远。三带喙库蚊可较长期地携带PRRSV，可能是PRRS的传播 的疫苗毒株， 根据血清抗体监测结果制定了适合的免疫程序。 鉴别诊断方法；对贵州省疫情调查，确定了高致病性PRRSV是引发贵州省生猪疫情的主要原因；发 病猪群针对PRRSV的血清抗体水平高于健康非免疫猪群，低于健康免疫猪群。②对PRRSV不同结 省PRRS流行毒株进化关系研究，确定了PRRSV贵州省流行毒株均属于美洲型毒株。在GP5基因 省共有3种Nsp2基因发生不同程度缺失的病毒同时流行。④通过病毒核酸检测和病毒分离鉴定，证 实了三带喙库蚊是PRRSV的隐蔽携带者；苍蝇在体表可携带PRRSV。⑤通过毒株遗传变异分析、 主要保护性抗原的优势抗原表位预测及疫苗接种试验，选定了适用于贵州省的PRRS疫苗，根据母 源抗体和免疫抗体的消长规律，制订PRRS免疫程序。 基金项目：国家科技部支撑计划[2007BAD53803]；贵州省科技支撑计划项目(农业攻关)黔科合 NY字[200913044号：贵阳市农业局科学技术计划资助项目([20081动防-03号) 100介导的t—PA基因在鸡体内表达及其在卵黄中积淀 Apo．B 的研究 in andaccumulationinthe of on vivochicken yolk Studyexpression t．PA apo．B100．mediatedgene 冯运巩，李银聚，程相朝，张春杰，郁川，王学强，张旭，张鹏 (河南科技大学动物科技学院，河南洛阳471003) t．PA是一种高效特异的溶栓药物，目前主要靠大规模培养哺乳动物细胞生产，存在生产成本高、 产量小、浓度低、价格昂贵等缺陷。因此，利用转基因动物生物反应器的特点并将其与t-PA的优点 结合起来大量生产用于临床治疗的t-PA药用蛋白具有广阔的市场前景。 275 全国兽医病理学、动物病理生理学学术会议论文集 白才能通过卵母细胞外的基底膜进入生长中的卵母细胞。VLDLy通过受体介导的内吞作用进入卵母 细胞是以apo-B100作为配体实现的，VLDLy组装过程对于它自身的各种成分含量有重要影响，并影 响卵黄的各种营养成分含量。因而可望通过调控apo．B100的基因表达来调控VLDLy的代谢，进而影 响卵黄的成分。 过程，以脂蛋白颗粒的形式，通过毛细血管、基底膜、颗粒层细胞、与卵母细胞受体结合以包涵体 的形式进入卵母细胞、在ATP一依赖性质子泵的作用下，受体和配体分离，完成VLDLy在卵黄中的 沉积。Apo—AtPA融合蛋白通过上述途径沉积在发育的卵泡中，为功能基因的表达探索出新的途径。 方法：1．构建pCDNA3．Apo．AtPA表达载体。将编码人组织型纤溶酶原激活剂功能区的基因片段 构建表达载体；2．脂质体转染。将pCDNA3一Apo．AtPA脂质体包裹后转入体外培养的鸡胚肝细胞和采 用翅下静脉注射入高产蛋鸡体内；3．融合蛋白表达检测。分别对体外培养的细胞和卵黄检测。定性 定位检测，运用SABC法检测不同组织器官融合蛋白表达水平；活性检测，采用发色底物法检测体 外培养细胞t-PA生物学活性，，琼脂糖平板溶圈法检测卵黄中t-PA活性。 结果；