SRAP分析体系的优化与在枇杷种质资源研究上的应用.pdfVIP

SRAP分析体系的优化及在枇杷种质资源研 究上的应用 乔燕春，林顺权，刘成明，杨向晖 (华南农业大学园艺学院，广州510547_) 系中，ToqDNA聚合酶、M92+、引物、模板DNA和dNTPs5种主要成分的适宜浓度或用量 分别是：dNTPS为0．3mmol／L，M92+为2．5mmol／L，Taq DNA聚合酶为1．ou，引物为0．75pmol／L， 循环，最后72C延伸10min。利用该优化的分析体系对来自美国、意大利、西班牙、日本 和中国的46份枇杷种质进行了SRAP扩增，经琼脂糖电泳获得了清晰、稳定的SRAP指纹图 谱。 关键词枇杷种质资源：SRAP；体系优化 related SRAP简称序列相关扩增多态性(sequenceamplified polymorphism)， 它是由美国加州大学蔬菜作物系Li和Quiros博士于2001年提出来的，是一种 新型的基于PCR的标记系统【1J。它针对基因外显子里GC含量丰富而启动子和内 含子里AT含量丰富的特点来设计引物进行扩增， 因不同个体的内含子、启动 子与间隔区长度的不同而产生多态性。该方法具有操作简便、中等产量、高共 显性、高重复性、易于进行条带分离及测序等优点，而且该类标记在基因组中 分布均匀，适合进行基因定位、克隆、遗传图谱构建及遗传多样性分析等生物 学研究【2，8，9m】。由于SRAP特殊的引物设计，可检测基因的可读框区域，因而体现 的是物种间基因的多态性，检测的结果更能反映物种的遗传多样性和亲缘关系 【2l O 本实验首先对SRAP体系进行了优化，在获得了重复性和可靠性均较好的条带后， 对46份枇杷种质资源进行了SRAP分析，以期为枇杷种质资源分类和育种提供 一些科学依据。 1材料与方法 1．1材料 实验于2007年在华南农业大学园艺学院生物技术研究所实验室进行，试材 取自华南农业大学枇杷种质资源圃，46份种质来自五个国家的普通栽培种枇杷 (见表1)，取一年生枝条的嫩叶装入自封塑料带回实验室，清洗叶背绒毛及杂质 后用吸水纸吸干各用。 1．2方法 1．2．1DNA提取基因组DNA的提取参照刘月学的方法略作修改【3l，具体如下： 取嫩叶o．29左右置研钵内，加入适量PVP在液氮中迅速研磨成细粉末，将粉末转 温浴期间多次颠倒摇动离心管使提取液与样品充分混合。经10000r／min离心 离心10min，吸取上清液转入另一离心管，加入等体积酚／氯仿／异戊醇(25：24：1， 洗1次，室温下风干30min，加50．OIJ．L的TE缓冲液和2pLRnase(10．Omg／m1)， 于水浴55℃中放置40min溶解并去除RNA。电泳检测DNA浓度，一20℃长期保存。 表1．供试枇杷属植物种类或品种及其来源 代号 种或品种 来源 代号 种或品种 来源 1． 24． 郁选+ Yuxuan 早钟6号ZaozhongNo．6福建Fujian 广东Guangdong 2． Javierin Javierin 25．． 解放钟自‘White 西班牙Spanish Jiefangzhong 福建Fujian 3． 华宝3号HuabaoNo．3湖北Hubei． 26．PeluchesPeluches 西班牙Spanis 4． 27． 光荣本Guangrongzhong安徽Anhui晚钟 Wangzhong 福建Fujian S． 冠玉Guanyu 江苏Jiangsu28． BiancoBianco 西班牙Spanish 6．