利用小干扰RNA技术在人脐静脉内皮细胞HUVEC中.pdfVIP

732 West China Medical Journal Vol.28 No.5 May 2013 2013 28 5 , , 华西医学 , （ ） 论　著 利用小干扰RNA技术在人脐静脉内皮细胞HUVEC 中 沉默copper chaperone for SOD1基因的研究 1 2 刘俊，陈克霏 【摘要】　目的　 采 用 RNA 干 扰 技 术 沉 默 CCS （copper chaperone for SOD1 ）基 因，构 建 相 关 小 干 扰RNA （siRNA ），探索出针对CCS 的高效 siRNA 序列。 方法　合成用于人脐静脉内皮细胞（HUVEC ）细胞中沉默CCS 基 因的 siRNA。应用脂质体转染的方法在 HUVEC 细胞中对 CCS 基因进行 RNA 沉默。蛋白免疫印迹 Western blotting 检测沉默前后 CCS 蛋白表达变化的情况，甲基四唑蓝法 MTT 检测转染前后细胞活力。最后用单因素方差分析对 数据进行统计学分析，以确定有效的 siRNA 序列。 结果　转染前后细胞形态无肉眼可见变化，转染后细胞活力分 别为 98.5% 和 98.8%。CCS 蛋白沉默率分别为 63.7% 和 61.4%。 结论　采用 siCCS-2 和 siCCS-3 序列转染条件对 HUVEC 细胞活力损伤小，CCS 沉默效率高，实验条件稳定，重复性好。为我们继续研究沉默 CCS 后抑制血管内皮 细胞的生长增殖、血管形成提供了稳定的实验基础。 【关键词】　copper chaperone for SOD1 ；基因沉默；小干扰 RNA 【文献标识码】　A　　　　DOI: 10.7507/1002-0179 Application of siRNA Technology to Silence Copper Chaperone for SOD1 Gene in Human Umbilical Vein Endothelial Cells　LIU Jun 1 2 , CHEN Ke-fei . 1. Department of Transplantation Surgery; 2. Regeneration Medical Research Center; West China Hospital, Sichuan University, Chengdu, Sichuan 610041, P. R. China Corresponding author: CHEN Ke-fei, E-mail: ckf2003@163.com 【Abstract】 Objective To explore efficient siRNA sequence for copper chaperone for SOD1 (CCS) genes by designing related siRNAs to silence CCS gene by RNAi technique. Methods　We synthesized siRNAs to silence CCS gene in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC), and it was done by lipofection. Then we detected the change of protein expression before and after RNA interference by Western blotting, and tested the cell activity before and aft