检测同型半胱氨酸的方法学进展和评价.pdfVIP

维普资讯 临床和实验医学杂志 2008年7Jl 第7卷 第7期 ·175 · 检测同型半胱氨酸的方法学进展和评价 吕伟标 罗玲 [广东省佛山市顺德区第一人民医院检验科 (南方医科大学附属医院)广东 佛 山 528300； 2卫生部北京医院检验科 北京 100730] 【摘要】 同型半胱氨酸是甲硫氨酸代谢过程中的主要中间产物，体内血浆半胱氨酸水平与心血管等疾病有着密切的关系。目 前，有多种检测半胱氨酸的方法，其中以新推出的循环酶法测定血浆半胱氨酸最为方便、准确、便宜，值得推广使用。 【关键词】 同型半胱氨酸 高效液相色谱 (HPLC) 荧光偏振免疫(FPIA) 酶联免疫吸附测定(ELISA) 循环酶法 同型半胱氨酸 (homocysteine，Hcy)是一种含硫氨基酸 ，为甲 方式的不同又可分为柱前和柱后衍生法。 硫氨酸(methionine，Met)代谢过程中的重要中间产物。在疾病条 高效液相荧光检测法 (HPLC—FD)采用柱前衍生 的技 件下，当酶的代谢出现障碍时，将引起血液中的Hcy升高，即高 术 ，然后用 HPLC将衍生物分离，最后用荧光检测。Fisker- Hcy血症。由于Hcy的检测技术的发展，对其研究逐渐深入 ，近 strand等 首先于 1993年采用全 自动HPLC法对血浆和尿液 年来的临床研 究发现 Hcy升高是心血管疾病 的独立危 险因 的Hcy和硫醇物进行测定 ，该操作如下 ：血液标本 以乙二胺 四 素…，另高Hcy血症可引起糖尿病微血管病 以及糖尿病大血管 乙酸二纳(EDTA—Na)抗凝 ，0～4~C2000转离心 5min，磺 并发症 J。因此，很有必要对心血管疾病和糖尿病患者进行 Hcy 基水杨酸沉淀蛋白质 ，上清液在再与 NaBH 溶液起反应，还 检测。 原二硫键 ，衍生化试剂为 0、025moVL的Monobromobimane， 目前，检测 Hcy的方法较多，最近又推出了在全 自动生化分 反应3min后以冰醋酸终止反应。20 l衍生化后 的样本进 析仪上应用的循环酶法 Hcy检测试剂盒，可更方便、便宜、准确 入一根 150mm×4．6mmODS柱 ，色谱柱预先用 pH3．5的硝 地检测Hcy。在此对各种检测方法作一介绍分析。 酸铵缓冲液平衡。然后用含有 乙腈 的流动相进行梯度洗脱， 1 检测方法 用荧光检测器激发波长365nm，发射波长475nm检测 ，在此 1．1 放射酶分析 (RadioenzymicAssays)法 是最早用于测定血 条件下，半胱氨酸 ，同型半胱氨酸的保 留时间分别为8min和 浆中总Hcy的方法。其原理 ：Hcy在 S一腺苷 一L一同型半胱氨 10．5min。此后 ，该法不断得到改进 ，使灵敏度 ，精确度和分 酸水解酶作用下，和 14C标记腺苷反应生成带有放射性的S一腺 析速度得到了很大提高 ，且与 GC—MS联用法有很好 的相关 苷一L一同型半胱氨酸 (SAH)，二硫赤藓糖醇 (dithioerythrito1)作 性 。 为还原剂 ，具有放射性的S一腺苷一L一同型半胱氨酸由闪烁计 高效液相电化学法 [HPLC—ED]具有样本处理简单 ，无需衍 数器或高效液相色谱(HPLC)定量。后经改良，用薄层层析或纸 生等特点，又较高的灵敏性、专一性和稳定性，应用较广泛。该 层析 分离或定量SAH，从而替代了HPLC。放射酶法具有高敏 法中有两种电极均可使用(H ／H 一玻璃电极，Ag／AgC1一碳糊电 感性和高特异性 ，也能检测尿中Hcy，却缺点是操作繁琐并具有 极)。由于电化学检测器的检测池易受污染和电极使用后易受 放射性。 污染并极易老化等，所以要注意保养，近年来该法改进后提高了 1．2 氨基酸分析仪 Andersson等 用该法测定血浆中的Hcy， 方法的灵敏度和精密度。 首先用二硫苏糖醇 (dithiothreito1)将样本还原，然后氨基酸分析 近年来，国内郭健等 J、戴崇文等 对 HPLC方法进行改