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2017-08-20 发布于山西
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高级生化作业答案.ppt

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* 1. 欲从一种真菌中分离苹果酸脱氢酶，现将培养好的菌体加入缓冲液，通过超声波法破碎细胞，过滤得到含酶的抽提液。假设已建立该酶活力测定的方法，请设计一个硫酸铵分级沉淀获得该酶的方法，写出具体步骤，并计算分级沉淀时硫酸铵的加入量。 1) 20%饱和度硫酸铵沉淀取100 ml 酶抽提液置冰浴。根据硫酸铵饱和度表，查出应称取固体硫酸铵10.6g，每次缓慢加入少许硫酸铵，边加边搅拌，同时检测溶液pH值，如果pH呈酸性可加少量NaOH维持酶抽提液的pH值。置冰箱4 h，离心，沉淀置冰箱用于测酶活力，上清液测量体积。 2) 30%饱和度硫酸铵沉淀假如上清液体积为98 ml，根据表计算称取固体硫酸铵为5.39g，其他操作同上。 3) 40%-80%饱和度硫酸铵沉淀根据上清液体积计算称取固体硫酸铵量见下表 75 80 85 90 95 上清液体积 4.96 70% 4.88 80% 5.1 60% 5.22 50% 5.32 40% 固体硫酸铵（g）硫酸铵饱和度 4) 将不同饱和度获得的硫酸铵沉淀用少量缓冲液溶解，测酶活力。以不同饱和度硫酸铵为横坐标，酶活力为纵坐标作图，见下图。 0 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 酶活力硫酸铵饱和度 10 20 30 40 50 （酶活力单位 U/ml） 5) 根据上图向酶抽提液加40%饱和度硫酸铵，置冰箱过夜，离心，弃沉淀。上清液测量体积，继续加硫酸铵使其饱和度达到70%，置冰箱过夜，离心，收集沉淀。 2. 请根据下述稳态法推导的有序机制方程，自行设计虚拟数据，用作图法求出动力学常数Vm、Kia、KmB和KmA，写清楚每一步骤。固定底物B浓度，改变A的浓度，上式同除以[B]可得：把上式变成倒数方程：以1/υ对1/[A]作图，斜率为: 纵轴截距为：横轴截距为： *