血浆中CYP2E1酶活力的高效液相色谱法测定.pdfVIP

2007年第一届劳动卫生职业病与环境医学学术研讨会论文集 143 血浆中CYP2E 1酶活力的高效液相色谱法测定 邬春华郑力行夏昭林 在人的肝微粒体中的细胞色素P450(CYP)主要有4．血浆样品的预处理：取用EDTA作为抗凝剂的血浆 CYPlA2、2A6、286、2C、2D6、2E1和3A，其中CYI)2E1酶不仅 0．5Inl于10nll具塞离心管内，加入0．2mo舰乙酸钠缓冲液 参与药物代谢，而且还能催化许多前致癌物和前毒物的活化 (pH 过程f11，它主要催化小分子量的毒前物质和癌前物质如NM．单位d一葡糖苷酸酶)，混匀后在37℃孵化3h。孵化后加入内 DA、苯胺、乙醚、四氯化碳等，并生成有毒物或致癌物，因此 cⅥ)2E1酶活性升高可能增加肿瘤和肝毒性损伤的危险性闭。振荡5Inin，1500r，血n离心5Inin，取出乙醚层(约4．5m1)于另 肝脏中的CYI)2E1在苯代谢活化中引起血液毒性过程中起 一干燥的离心管内，40℃水浴在气流下吹干。残渣加入200斗l 了主要作用，它将苯转化成苯酚，氢醌及邻苯二酚网。CⅥ)2E1 酶的探药有3种，对硝基酚、N一亚硝基双甲胺及氯唑沙宗 进样。 (cllloaoxazon，CzX)，其中前2种对人体有害，只能用于体外二、结果 研究；而氯唑沙宗是一种中枢性肌松药，低剂量时对人体无 1．工作曲线：取血浆O．5Inl．加入不同量的氯唑沙宗和 毒，主要在肝脏经6一羟化代谢生成6一羟基氯唑沙宗(6一hy．6一羟基氯唑沙宗，使成血浆中Czx浓度为0．59、1．18、2．95、 droxychlorox犯one，Hczx)，因它的代谢途径主要由CⅥ)2El 催化，所以氯唑沙宗能在体内外作为CYP2E1酶的探针而反 映其活性。测定血浆中CⅥ，2E1酶活性一般采用高效液相色 实验。以待测组份与内标物的峰面积比值K为纵坐标。待测 谱法㈣，本实验对这些方法进行改进，使测定方法简单，结果 物浓度c为横坐标，得氯唑沙宗与6一羟基氯唑沙宗的线性 可靠。 一、材料与方法 关系数分别为O．9980、O．9998 1．仪器：HPlloo高效液相色谱仪，二极管阵列式检测器 2．精密度：取血浆0．5Hd。加入不同量的氯唑沙宗与6一 并配有3D化学工作站，SB一2200型超声波清洗仪(上海必能 羟基氯唑沙宗，使成血浆中氯唑沙宗浓度分别为2．95、 信超声有限公司)，xw一80A旋涡混旋器(原上海医科大学仪 器厂)。 并加入内标，每个浓度做5个平行样品，连续5天测定得到 2．试剂：标准品氯唑沙宗，6一羟基氯唑沙宗及B一葡萄糖 天内与天间精密度均小于5．0％。 苷酸酶(SIGMA公司)，2～苯并恶唑烷酮(2一benzoxazolinone。 3．回收率；取血浆O．5IIll，加入不同量的氯唑沙宗与6一 Alddch公司)，四氢呋喃和乙腈均为HPLC级(Dikma公司)， 羟基氯唑沙宗各l、0．25峭，使成血浆中氯唑沙宗浓度分别为 流动相所用水经Mmi—Q净化系统精制，乙酸铵等其他试剂 2．95、11．80斗mo帆，6一羟基氯唑沙宗浓度分别为2．70、 为分析纯。提取液为500Inl乙醚加30IIll乙腈混合液。氯唑沙 10．78斗mol／L每个浓度做5次，测得的值与未经提取的标准品 宗及6一羟基氯唑沙宗分别用甲醇配成1．18、1．08mmo】／L的 对照。计算绝对回收率(％)。前述2个浓度下氯唑沙宗与“羟基 贮备液并于一18‘C保存，临用时稀释。内标2_苯并恶唑烷酮用氯唑沙宗绝对回收率平均值分别为(％)89、90和81、92。 甲醇配成O．296 mmol／L的贮备液并于一18℃保存，备用。 4．方法应用：受试者在受试前48小时内戒酒