湖南部分地区犬狂犬病病毒监测研究.pdfVIP

人兽共患病一病毒病 湖南部分地区犬狂犬病病毒的监测研究 郑文成l 张朝阳2范仲鑫2邱立新2刘道新2李文平3 大学，湖南长沙4lOl28) 披要对湖南部分地域的8个县(市)区的8个城区、乡镇开口农村的健康犬抽样采集脑组织标本142份，应用RT-PCR 和直接荧光抗体试验(FAT)检测，检测结果142份犬脑样中均不舍狂犬病病毒。调查上述监测点及周边近三年狂犬 病的免疫情况，免疫率均超过70％。表明湖南部分犬免疫工作较好的地区，通过加大群免疫密度，可以使犬狂犬病 病毒携带率降低，这可能与形成免疫屏障有关。 狂犬病是由狂犬病毒引起温血动物的一种中枢神经系统发生严重病变的人兽共患传染病，是迄 今为止人类病死率最高的急性传染病。一旦发病，死亡率几乎达100％。据世界卫生组织统计，全世 界每年冈狂犬病导致的死亡人数为4万～7万。而我国卫生部门公布的统计数据表明，自2000年开 以来的最高点，而且发病地区在逐年增多，凶而狂犬病已成为人们十分关注的公共卫生和社会问题。 湖南省是狂犬病高发的几个主要省份之一，狂犬病引发的问题向来都比较突出，本研究对2007年采 自湖南部分地区犬脑组织进行了狂犬病实验室枪测，目的足监测湖南省部分常年进行狂犬病免疫工 作较好的地区犬的带毒情况，为湖南狂犬病病毒流行病等方面的研究提供科学的依据，并为制定合 理的防治措施打下良好的基础。 l材料 1．1检测样品 市安化县采集扑杀犬脑组织15份；2008年2月湖南张家界市采集扑杀犬脑组织64份：慈利县10 份、永定区lO份、武陵源区10份、桑植县34份，共计142份。以上病料均用吸管法采集犬脑组织， 冷冻运送至实验室，_80℃保存待检。在中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所农业部狂犬 病及野生动物与人共患病诊断实验室检测。 1．2主要试剂 Triz01 reagent，购自Invitrogen公司： M—MuLV反转录酶，购自NEB公司； dNTP(2．5mM)、Ex M矧ker等购自大 1’aq、砌domprime“50pmol／“L)、RNasin(20U／uL)、DL2000 连宝生物工程有限公司； 异硫氰酸荧光素(F1uorescein iso蚰ocyaIlate，FITC)标记的犬抗狂犬病毒单克隆抗体(McAb)由本 室制备【86】，工作浓度l：500； MEM培养基为GIBCo产品； 无水乙醇、氯仿、异丙醇、丙酮，甘油等化学药品均为国产分析纯制品。 1．3主要试剂的配制 (1)MEM培养基：MEM粉状固体134克，NaHC033．7克，溶解于800mL去离子水中，调pH 值至7．O，定容至lL，0．22岫滤膜过滤除菌，4℃保存。 (2)TE缓；仲液：10mmol／L啊s·cL(pH8．0)，lmmo儿EDTA(pH8．0)。 (3)50×TAE贮存液：2429 lL，室温保存，使用时以双蒸水稀释。 EB (4)EB贮存液： 19溶于100札去离子水中，浓度为10mg，mL，4℃保存。 (5)PBS(pH7．4)：NaCl8．09、KH2P040．29、Na2HP04·12H202．99、KCl0．29，溶于蒸馏水并定 容至1000111L。 1．4主要器材 1390 第十三次学术研讨会会议论文集 电泳仪(Bio_Rad3000】【i)；高速冷冻离心机(Sigm2K．15)；凝胶自动成像系统(U、田；PCR仪 PCR (Ger屺AmpSystem2400)；低温冰箱(Ha而s 器厂)；八联管(QSP)；0．2111l、0．5lIll、1．5rnJ离心管(Axygen)。 2方法 2．1病毒监测 2．1．1 犬脑组织的R’r-PCR检测 2．1．1．1样品的处理 (1)脑组织样品处理：称取待检脑组织病料(海马角)o．19至研磨器中，避免样品间交叉污染，pH7．2 冻存，以分离病毒。 (2)阳性对照处理：取sRV9细胞培养毒200pL，置1．5mL离心管中待检。 脑悬液100¨L，置1．5mL离心管中待检。 2．1．1．2