基于18S+rDNA序列南极冰藻分子系统学研究.pdfVIP

劫协侣住9 6 3 O l 图6 温度对ChorophyceaeL-4(a)和扁藻(b)细胞质内Na+／C比值的影响 温度：a．1为6℃；2为OC；3为．6℃。b．1为15(2；2为6C；3为OC． 参考文献(略) 基于18SrDNA序列的南极冰藻分子系统学研究 刘晨临，黄晓航，李光友 (国家海洋局一所，海洋生物活性物质重点实验室，青岛266061) 1．前言 南极地区具有独特的地理及气候特征。严酷的极地环境造就了生活在这种极端海冰环境中的南极冰 藻独特的生物学特性。除了其生态学上的重要性之外，这些藻类还被认为是这一被冰雪覆盖的次大陆的 特殊生命类型，并日益成为现代生物技术研究的焦点(Thomas 2002)。开展南极冰藻研究所面临的问题是， 无论是生态学研究，还是进行生理生化研究或是进行生物技术领域的开发利用，首先必须确定的是南极 冰藻的分类学地位。在此基础上，后续的研究工作才有意义。因此，弄清南极冰藻的分类学地位，确立 其在分子系统学中与其它藻类的亲缘关系和进化地位，不仅是今后开展南极冰藻研究必不可少的基础性 工作，而且其本身也是很有意义的一项研究课题。 我们从南极地区的浮冰中分离到了两株单细胞绿藻，并以单克隆的方式在实验室进行培养。它们属 于严格嗜冷的微藻，并具备南极海冰生存环境相适应的生活特性。它们的最适生长温度范围为O一10℃， 在低于OC的结冰海水中仍然能够生长和繁殖；但是当生长温度大于15℃，它们将很快死亡。相比较常 et 温绿藻，这些南极冰藻对紫外线不敏感或者说对紫外线具备一定的抵抗力(Miaoa1．2002)。为了进 一步研究它们与极端环境相适应的功能基因，首先在形态学和分子生物学水平上研究并明确其分类地位 是非常重要的。 2．材料与方法 培养材料 含有南极冰藻的南极冰水样由上海极地研究所提供。样品采自南极中山站附近的浮冰中(69。S，770 ·402· 12日照周 E)。冰藻ICE—L和ICE-W的单藻培养保存于我室南极冰藻藻种库。培养温度为5—10℃，12t 期，采用Provasolin培养基培养。 DNA提取，扩增，克隆和测序 DH5 载体连接，链接产物转化至尻colia细胞。有插入片断的克隆，送去测序。将得到的序列片断拼 接后，获得完整的18SrDNA序列。 系统发生分析 Two 一对核苷酸序列间相似性的比对分别通过NCBI的Blast Sequence进行。选取的核酸序列几乎 W 包含了所有GenBank数据库中可得到的衣藻188rDNA数据。18SrDNA序列的多序列比对通过Clustal eta1．1 8S 994)软件进行分析。比对结果在BioEditv4．7．8．软件包手工进行了校对。1rDNA中 (Thompson 有1520 bps长度的核苷酸用来进行序列比对。为有效地进行对比，