基于OFFGEL预分离人外周血淋巴细胞可溶性蛋白质组学研究.pdfVIP

第十七届全国色谱学术报告会及仪墨展览会舍议论文集 P-H032 基于OFFGEL预分离的人外周血淋巴细胞可溶性蛋白质组学研究 张倩，朱勇，熊嫣，段晋燕，牟晓玲，邓玉林” 北京理工大学生命科学与技术学院，北京100081 随着后基因组时代的到来，人类对生命科学的研究已经开始侧重于关注多分子信息流动的生命 过程。因此，从整体角度揭示生物体内蛋白组成和动态变化规律的蛋白质组学，逐渐成为生命科学 中最为话跃的前沿领域之一。 为了维持人体健康的生理状态．免疫系统麓挥着非常重要的作用．对免疫系统的蛋白质组学研 究可虬有助于解释人体在应激和疾病条件下生理状态的改变。外周血液因其循环于全身各个系统． 便于取样，所咀对外周血淋巴细胞蛋白质组的研究可以为疾病生物标记物的寻找提供基础的数据来 源，对临床疾病的诊断和治疗具有重大的意义。 的等电点不同而进行电泳分离；在电泳结束时。由于腔内外蛋白质的i枉度差和电诛水化液之间；叠透 压的差别，使得样品从胶条内渗入电泳水化液中．从而达到对样品进行回收和富集的目的。 本研究以健康人外周血为样本．墩淋巴细胞中可溶性蛋白为考察对象．采用基于OFFGEL预分 离液相色谱串联质谱检测的技术，对人外周血琳巴细胞可溶性蛋白进行检测、鉴定和初步分类。 关键词：蛋白质组学，淋巴细胞，液相色谱．质谱，OFFGEL 1实验方法 3100OFFGEL 健康人外周血淋巴细胞可溶性蛋白经酶解、脱盐后，依Agilent Fraefionmor操作 说明溶解、上样，选取肚段预设分离模式运行：将分离好的肽段馏分通过反向液相色谱，质谱(Agilent 6510Q-TOFLC，ESI-MS／MS)检测。 获得的质谱数据通过Mescot(2 日)和IPI(Intematiomd 功能进行GO(geneontology)分类。 2结果与讨论 2．1采用Swiss—Prot和IPI数据库检索蛋白 部分的蛋白质组学研究都采用Swiss-Prot数据库来确定蛋白。 一 ，。文_{jm一 ～、叫夕 9 田ls悔P吼与唧戢据库检索结果 圈2Swl“-Prot赣据库控寨到的蛋自按功睫GO分类 ”迥讯联系^·戟拓北京理工大学生命科学与拄术学院．Em叫，d州融k咖瑚 1112 第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 结果显示，若要增加检索结果的可信度，减少假阳性情况的发生，可以采用以Swiss．P咖数据 库为主，IPI数据库为辅的检索方式。 2．2检索到的蛋白按照功能分类 分为免疫应答、细胞周期脚胞凋亡、信号转导、新陈代谢、细胞骨架相关、神经系统相关、其它和 未知功能蛋白共八类(图3)。其中．包括许多与重大疾病相关的蛋白(表l，图3)。 衰l捡测到的部分与重大疾稍相关蛋白质 蛋白质名称 生理功能 相关疾病 调节多巴胺释放和转运．是路 帕金森病 易小体的主要成分 }synuclein 老年斑的非淀粉状蛋白主要 阿尔菠海酞氏病 成分 Mabixmetalloproteisase在破骨细胞吸收中具有重要 关节炎 作用 Thrombospondin·I 参与调节肿德产生和转移 肿瘤 Fibfinogenp-chainprecursor在血小板聚集中作为辅助因 血栓 子 Fibtlnogeny-chainprecmor 1；艳点亳；羔==。 。“曼b基亳甚童i￡