枸杞悬浮培养条件下的胚状体发生.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)12(6)5-71990 拘祀悬浮培养条件下的胚状体发生 牛德水 邵启全 张敬 （中国科学院遗传研究所，北京，100101) 秦金山 王莉 陈素萍 （山西省医药研究所，太原） 在 MS培养基上诱导宁夏拘祀下胚轴切段形成愈伤组织，并进行细胞悬浮培养。观察了悬浮培养 条件下胚状体的发生过程。1＞观察发现，细胞经悬浮培养几天以后，先形成胚性细胞团，再由胚性细胞 团块形成一个或几个胚状体。较大的胚状体也可以形成新的次生胚状体。2影响胚状体形成的关键 因素是激素的种类及其含量。实验采用的基本培养基为 MS，比较适宜胚状体发生的激素是 。.2mg/L 2,4-D。同样浓度的 2,4-D，会抑制胚状体的进一步发育，用 0.2mg/L6-BA代替 2,4-D，则胚状体可 以进一步发育并形成小植株。 关键词：宁夏拘记，胚性细胞团块，胚状体，悬浮培养 自，0年代末，Steward等 （1958）和 Rei- L.)。将种子在无菌滤纸上发芽，当芽长到 2- nert(1959）几乎同时发现，从培养的胡萝 卜 3厘米时，将下胚轴切成约 0.5cm长的小段作 根细胞可产生胚状体以来，许多植物学家在这 外植体。 个领域里开展了广泛的工作。到80年代初，经 基本培养基采用MS，附加0.2mg/L2,4- 统计，已得到胚状体的植物为43科97属114 D,蔗糖 30g/L,琼脂6.5g/L,pH值，.8左右， 种11-［21，从而表明胚状体发生在高等植物中是一 诱导外植体产生愈伤组织和继代培养。用作细 个普遍的现象。 深人研究胚状体的发生和发 胞系悬浮培养的培养基同前，只是其中不附加 育，对于建立植物的无性繁殖系 S（omaticclo- 琼脂。采用往复式摇床，每分钟80次。培养温 ne)、阐明细胞分化和形态发生的机理以及有关 度为24-260C,摇床中部光照强度为1500Lux, 的理论问题，都有重要的意义。 每天光照10小时。 构祀是重要的药用植物。近年来，国内外 在继代悬浮培养过程中，用50目及100目 学者十分重视以拘祀为材料的组织培养4-〔7,1]1。 镍丝网两次过滤悬浮培养物，得到平均密度为 我们曾利用拘祀下胚轴进行组织培养，并且通 4.5X10‘的单细胞悬浮液。另一部分悬浮培 过悬浮培养建立了细胞系，发现悬浮培养物中 养物不经过滤。对两种细胞悬浮液，定期取样 可以大量产生胚状体61〔。本实验利用已建立的 观察胚状体发生过程。用附加不同激素及有机 实验体系，对拘祀在悬浮培养条件下的胚状体 成分的培养基进行悬浮培养，观察激素及有机 发生的主要条件进行了实验研究。以拘祀为材 成分对悬浮培养物形态及胚状体形成的影响。 料，通过悬浮培养研究胚状体发生的工作，尚未 一（）悬浮培养细胞系的建立 见报道。 下胚轴切段在MS-t-0.2mg/L2,4-D培 材 料 和 方 法 Niu Desbui er al.: Somatic Etnbryogenesisof Lycium barbarumL.inSuspenslon Culture 所用材料为宁夏拘祀 (Lyciumbarbarum 本文于 1989年12月Z6 日收到。 养基上，大约10夭左右开始产生愈伤组织，其 未经过滤的悬浮液，每次继代转接后4-5 诱导频率可达95.7并[61。 当愈伤组织直径达 天，胚状体大量出现。胚状体比重较大，表面光 1.5-2.Ocm时，开始悬浮培养。初始培养，平 A，与愈伤组织颗粒容易区分。胚状体形成的 均每支 50m1的三角瓶内放人 15m1培养浓 速度比过滤悬浮液快，数量也多，这是由于在悬 和约3厘米’的愈伤组织。 经过选择并连续培 浮液中已经存在较