斑马鱼肠黏膜屏障的结构与组成.pdfVIP

112 实验动物与比较医学 LaboratoryAnimalandComparativeMedicine doi：10．39690．issn．1674—5817．2013．02．006 斑马鱼肠黏膜屏障的结构与组成 章琳俐1，姚一琳1，初晓红1，张 茜1，杨 平 ，卞勋光-， 刘 仪 1，胡建华2，高 诚z，林金杏z，陈秋生1 (1．南京农业大学动物医学院，南京210095；2．上海实验动物研究中心，上海201203) 摘【要】 目的 观察和分析斑马鱼肠黏膜屏障的结构与组成。方法 应用透射电镜、组织化学以 及免疫组织化学技术，系统观测和分析斑马鱼肠粘膜屏障的组织结构和细胞组成。结果 斑马鱼 肠道吸收细胞之间具有发达的连接复合体，自上而下依次可见紧密连接、中间连接和桥粒，它们 构成封闲的机械屏障；肠黏膜上皮的吸收细胞之间分布着丰富的杯状细胞，尤以后肠的数量最多， PAS反应呈强阳性，其分泌物在肠腔面形成一层粘液层，为肠黏膜化学屏障的主要细胞；肠黏膜 上皮内淋巴细胞和肥大细胞，为斑马鱼肠黏膜的主要免疫细胞。黏膜上皮中内分泌细胞既有开放 型也有封闭型，纹状缘发达呈线状(或膜状)衬于肠上皮腔面。结论 斑马鱼肠黏膜屏障系统由较 完整的机械屏障、化学屏障和免疫屏障的结构组成，可作为肠黏膜屏障研究的动物模型。 关【键词]斑马鱼；肠道；黏膜屏障；结构 【中图分类号】Q95．33 文【献标识码】A 文【章编号】1674—5817(2013)02—0112—05 肠道作为与体外相通的管状器官，经常受到 1 材料与方法 各种物理、化学和生物因素的刺激，如何维持肠 1．1 实验动物 道的正常生理结构和功能就显得尤为重要。同时肠 实验用性成熟AB系斑马鱼共 30尾，来 自上海 道还是机体质量要的免疫器官，是机体抵抗外来抗 实验动物研究中心，鱼全长3．50～4．05cm，体长 原威胁的重要场所。斑马鱼作为新型模式动物在环 2．32～3．36cm，体质量0．139～0．522g，取材前 境监测、药物筛选 【】和毒性试验 【I5】中被广泛应 1d禁食 。 用，其长期生活在水环境 中，肠黏膜受到水与食 1．2 光镜样品制备与观察 物的双重物质威胁，肠黏膜屏障的功能具有不同于 切除斑马鱼头和尾，部分鱼躯干经Carnoy液 哺乳动物的特殊性。以往关于肠黏膜屏障的实验研 固定24h，取出内脏团，再固定24h，石蜡包埋， 究主要集 中在哺乳动物，鱼类的资料鲜有报道 。 切片厚为5mHl，用于PAS反应。部分样品以10％ 本文采用电镜、组织化学和免疫组织化学技术， 中性甲醛固定，常规石蜡切片用于免疫组织化学反 对斑马鱼肠黏膜屏障的结构和组成进行系统探究， 应 。封片后用 Olympus显微镜观察并拍照。 为斑马鱼在免疫、环境监测和疾病模型建立等方面 1．3 透射 电镜制样与观察 的研究提供理论基础。 将肠道分为前、中、后 3段，分别固定于 4℃ [收稿 日期】2012—05．29 预冷的体积分数2．5％