葡萄的脱毒与快繁-植物组织培养.pptVIP

主讲：张磊蕾 葡萄属落叶木质藤本植物，葡萄地上部分的茎细。节上具有卷须，可向上攀援。叶近圆型或卵型，3～5裂。 葡萄原产于温带地区，不太抗寒。葡萄的根系抗寒力很弱，在－5～－7℃时即受冻。 一、形态特征和生物学习性 二、葡萄的组织培养 1、选材接种：从生长旺盛的葡萄新梢顶端取1～2㎝的茎尖,消毒,分离出约2mm长的茎尖，接种到培养基上。 2、培养基：MS培养基，再添加6-BA 1～2mg/L，NAA0.01mg/L，LH100mg/L，蔗糖2%，琼脂0.6%，而B5培养基愈伤组织化严重，茎尖生长不好。 3、苗分化：6-BA0.5mg/L，同时添加GA30.2，黑暗处理可促进幼茎的伸成，提高成苗率。 4、根分化：将苗转入 MS+IAA 0.4mg/L+NAA 0.05mg/L 培养基中进行生根。 三、脱毒与快繁 葡萄受到26种病毒的危害,主要有卷叶病毒、栓皮病毒、扇叶病毒、黄脉病毒和斑点病毒等。由于病毒的危害，葡萄的长势减弱，产量降低，果实的糖分含量减少，风味变劣。 葡萄卷叶病是危害最大的病毒病。 （一）脱毒 （1）将材料置于38℃，CO21200mg/L的人工空气侯箱内。经30min处理，较易从枝条尖端或休眠芽中除去扇叶病毒。其他病毒较难消除。 （2）直接将葡萄蔓浸泡在50℃的 温水中10～20min，可以治疗皮尔斯病。 （3）将感染材料的修面芽插入健康指示植物的蔓中，然后在38℃的环境中保持2个月，以后取出枝条和接种芽继续生长。 1、热处理脱毒： 2、茎尖培养脱毒 在25℃，相对湿度80%，每日16h的长日照条件下水培生成新芽，剥离切取带1~3个叶原基0.2~0.3mm茎尖进行立体培养，即可获得脱毒苗。 3、无病毒苗的鉴定 用抗血清法、电子显微镜检测法、ELISA法或指示植物进行病毒鉴定，以确保脱毒后的试管苗不含病毒。 （二）快繁 1、材料与消毒 取经过脱毒的枝条稍1~2cm，用5%的次氯酸钠aq消毒2~3min，用无菌水冲洗3次，再在0.1%升汞aq中浸泡2min，用无菌水冲洗4次。把芽放在解剖镜下，无菌条件下，去除幼叶和叶原基，使生长点暴露。用刀切下含有1~2个叶原基，大小为0.2~0.3mm的生长点接种于培养基上。 2、培养条件 培养基 茎尖分化与继代培养培养基：1/2MS+6-BA 0.5mg/L+LH100mg/L+NAA0.01mg/L+GA0.2mg/L,2%蔗糖，0.6%琼脂，PH=5.8 生根培养基：1/2MS+IAA0.4mg/L+NAA0.05mg/L 温度：25±2℃ 光照：1000lx，16小时 3、生长与分化 接种成活的茎尖在一个月左右开始分化出芽和侧芽，两个月左右形成芽丛，即可进行大量增殖。每月继代一次，每个芽丛切成10个。 4、生根培养 剪取2~3cm长的无根幼苗，插于上述培养基上，1~2周内幼苗生根，一个月形成发达的根系，同时长出5~6片新叶，生根率达90%以上。 5、试管苗的驯化与移栽 试管苗长出5~7片新叶时，把瓶子移入温室中，即时可打开培养瓶，历时7d。把苗从培养瓶中取出，洗净培养基，栽于经过干热灭菌处理的蛭石内，盘上塑料薄膜罩严，置于阳光下，20 ℃，自然条件下锻炼15d。移入土中。 小结： 葡萄的脱毒与快繁 形态特征和生物学习性 葡萄的组织培养 选材接种 培养基 苗分化 根分化 脱毒与快繁 脱毒 快繁 热处理脱毒 茎尖培养脱毒 无病毒苗的鉴定 材料与消毒 培养条件 生长与分化 生根培养 试管苗的驯化与移栽 08生物教育 张磊蕾