蓝光诱导促进黑曲霉产糖化酶的研究.pdfVIP

46卷5期 微 生 物 学 报 46(5)：734_739 2006年10月4日 Ac缸M切们曲^喀i阳S跏如4 40ctober2006 蓝光诱导促进黑曲霉产糖化酶的研究 朱俊晨1’2，王小菁1*，张广3，苏 捷2，朱 明2 (1华南师范大学生命科学院广州510(弭1) (2深圳职业技术学院生物工程系深圳518055) (3清华大学深圳研究生院生命科学部深圳 518055) 摘要：考察了蓝光对黑曲霉产糖化酶的影响并采用扫描电镜观察蓝光下黑曲霉形态发育过程，结果表明，与黑暗 对照组相比，蓝光处理使菌丝粗壮，孢囊增大，分生孢子发育提前，黑益霉糖化酶活力增加，孢子发育和产糖化酶的 进程有一定的对应性。黑曲霉在黑暗下生长至36h时，经蓝光诱导糖化酶产量提高更为明显，提示了黑曲霉存在 一个对蓝光反应产生最适光感应的发育阶段，对于光调节黑曲霉产糖化酶来说，蓝光诱导的光强由弱到强，比持续 蓝光培养或采用较高光强诱导效果更好，表明黑曲霉产糖化酶存在一种光适应机制，能够感应和适应光强度变化， 调节其自身代谢。从抑制性扣除杂交实验和蓝光光强变化对差异基因表达的分析来看，糖化酶基因以及呼吸链中 部分氧化还原酶基因在蓝光诱导下表达皆有增强，蓝光信号转导影响了核基因编码的线粒体呼吸链相关酶基因表 达水平，交替氧化酶可能参与了蓝光信号途径，影响了黑曲霉产糖化酶和孢子发育。研究结果可为在现有水平上 应用蓝光调节提高糖化酶产量找到新的技术突破口和提供新思路。 关键词：蓝光；黑盐霉；糖化酶 中图分类号：Q936文献标识码：A 文章编号：0001．620912006】05．0734．06 除了植物以外，光信号的感应现象还存在于很 用中引入光这一参数提供必要的理论依据．我们选 多非光合作用的生物中，其中蓝光作为重要的环境 择了产糖化酶黑曲霉东酒l号为材料，研究蓝光作 信号，能够调节包括真菌在内的很多生物的生长发 用下黑曲霉产糖化酶规律和光反应机制，以探索在 育、代谢、向光性和生理节律变化在内的很多生命活 现有水平上提高黑曲霉糖化酶产率的新途径，也为 动u。o。虽然目前很多研究表明不少发育和生理过 光调控霉菌的生命周期、生长发育及其酶制剂的工 程都受蓝光的影响，如调节其代谢、生长、有性和无 业化应用奠定理论基础。 性发育、色素形成、向光性等哺删，然而真菌对光应 1材料和方法 答的确切机制还有待于更进一步研究和阐明旧o，而 深入了解光信号在真菌生长发育过程中的作用对于 1．1材料 更好的开发利用真菌价值来说是又非常重要的，目 1．1．1光源：40W蓝色荧光灯由广州灯泡厂生产， 前国际上在光调节真菌发育和生理方面，研究较多 将蓝色光源通过蓝色滤膜(#73)(日本穸，p尹彳 的主要是是须霉、脉孢菌和木霉，而对黑曲霉光反应 工又株式会社生产的截止型滤膜)而获得较纯的蓝 现象的研究还未见报道。 糖化酶，又称葡萄糖淀粉酶(Glueoamylase，Ec强调为500(咖1m一2s．1，温度控制为(28±2)℃。 3．2．1．3)，作为淀粉原料糖化的一种重要酶制剂广1．1．2菌株和培养基：黑曲霉(A妒铝伽凇n咖r)东 泛应用于酿酒业、制糖业、医药等行业，具有优良的 酒l号，由广东微生物研究所提供。采用查氏培养 节能前景，其价值已广泛被人们认识。黑曲霉 基并加以改进，添加1％可溶性淀粉，0．3％大豆粉， 1％葡萄糖和0．1％酵母膏，pH6．0。 (A耻rgiff淞n咖r)既是糖化酶的重要生产菌，也是外 源基因在丝状真菌的重要表达系统，有着重要的生 1．1．3 主要试剂和仪器：逆转录酶(AMV)为 产实践意义。因此，研究黑曲霉在