血液中葡萄糖的测定.pptVIP

血液中葡萄糖的测定 ——邻甲苯胺法 一、实验目的 掌握血糖的测定方法。 二、实验原理 葡萄糖在热的醋酸溶液中，与邻甲苯胺缩合成雪夫氏碱(Schiff base)。 雪夫氏碱呈兰绿色，其最高吸收峰为630nm波长，颜色深浅与葡萄糖含量成正比。反应式如下: 三、实验器材 分光光度计（630nm），比色皿 计算纸（9 cm×9 cm） 3. 水浴锅 4. 10ml容量瓶 四、实验试剂 1. 邻甲苯胺溶液 2.5g硫脲溶于冰醋酸，加入邻甲苯胺150ml及2.4%硼酸100ml，用冰醋酸定容至1升 2. 葡萄糖标准母液 （10mg/ml，用饱和苯甲酸溶液配制） 3. 血清 （～100ml） 五、实验步骤 取5支10ml容量瓶，标号，依次加入葡萄糖母液0.25，0.5，1.0，2.0，3.0ml，用饱和苯甲酸稀释至10ml，混匀（则上述溶液100ml葡萄糖含量为25，50，100，200，300mg ）； 混匀后，置沸水中 15分钟，立即移入冷水浴中冷却； 以0号管调零，在630nm 处比色（见下表），以各管的 吸光度为纵坐标，相应管中葡萄糖含量（mg）为横坐标，绘制标准曲线，并根据测定管吸光度查找含量。 六、附注 1. 本法不需要除去蛋白质，邻甲苯胺试剂只与醛糖显色，血液中其他还原性物质基本上无影响。 2. 邻甲苯胺试剂