核酸杂交的基本原理.docVIP

核酸杂交的基本原理 原理是具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下根据碱基互补的原则可以形成双链。 基因组探针CDNA探针 RNA探针的特点 基因组DNA探针：为某一基因的全部或部分序列，或某一非编码序列。 制备：基因克隆；PCR扩增基因组特定片段 优点：多克隆在载体中的DNA片段，可以无限繁殖，量大；PCR制备探针更加简便省时。 cDNA探针：指互补于mRNA的DNA分子。 制备：以mRNA为模板，按照碱基互补的原则，经逆转录酶催化合成的。 优点：不存在内含子和高度重复序列，是一种较为理想的核酸探针。 RNA探针：以DNA两条链中的任意一条为模板转录生成RNA。 优点：稳定性高，杂交效率高， 缺点：易于降解和标记方法复杂。 探针标记的方法 理想的探针标记物应具备以下特性： 敏感性高； 标记物与探针结合后，不影响杂交反应，尤其是杂交特异性、稳定性和Tm值； 检测方法要高灵敏性、高特异性、稳定、简便、假阳性率低； 标记对环境污染小，对人体无损伤，价格低； 标记物对检测方法无干扰。 放射性同位素标记 放射性同位素标记法 缺口平移法 随机引物法 DNA探针的末端标记5’端标记法3’端标记法 PCR标记DNA探针 非放射性标记 酶促反应标记法 化学修饰标记法 各种固相杂交方法的适用范