A.粗糙脉胞菌顺序四分子分析(杂交)B.植物染色体组型分析.pptVIP

Ａ.粗糙脉胞菌顺序四分子 分析（杂交）Ｂ.植物染色体组型分析 Ａ.粗糙脉胞菌顺序四分子分析（杂交） 实验目的： 1.了解粗糙脉胞菌的生活周期及特性； 2.学习粗糙脉胞菌的培养方法和杂交技术； 3.学习顺序四分子的遗传学分析方法，进行有关基因与着丝点距离的计算和作图。（第八周） 粗糙脉胞菌（粗糙链孢霉） 真菌门、子囊菌纲、球壳目、脉孢菌属 菌丝为单倍体n=7 粗糙脉胞菌用于遗传分析的优点： 1.体积小，易增殖，易培养，杂交程序简单，一次杂交可产生大量后代； 2.可以通过X射线、紫外线照射或某些化学药品处理的方法诱发产生多种突变体； 3.能进行有性生殖，有性生殖的生活史短，染色体结构、功能类似于高等动植物； 4.子囊孢子是单倍体，没有显、隐性复杂关系，表型直接反映基因型； 5.有性生殖产生的顺序排列的子囊孢子便于进行四分子分析。 粗糙脉胞霉的遗传(n=7) 有性生殖过程： 　　+、-接合型菌丝接合受精→在子囊果的子囊菌丝细胞中形成二倍体合子(2n)→减数分裂→形成4个单倍的子囊孢子(四分孢子)→有丝分裂→形成8个子囊孢子、按严格顺序直线排列在子囊内。 脉胞菌减数分裂的4个产物保留在一起，称为四分子→（子囊的外形狭窄，以致分裂的纺锤体不能重叠，只能纵立于长轴中，所有分裂后的核——8个子囊孢子都从上到下顺序排列）顺序四分子。 四分子分析：对四分孢子进行遗传分析，通过四分子观察，可直接观察其分离比例，检验其有无连锁。 实验材料 1．粗糙链孢霉野生型菌株，Lys+(分生孢子粉红色）； 2．粗糙链孢霉赖氨酸缺陷型菌株，Lys-(分生孢子白色）。 实验步骤 1．菌种活化： 为使菌种生长得更好，先要进行菌种活化。把野生型和赖氨酸缺陷型菌种从冰箱中取出，分别接在两支完全培养基试斜面上，28℃温箱培养5天左右。培养到菌丝的上部有分生孢子产生。 实验步骤 2．杂交： （１）同时在杂交培养基上接种两亲本菌株的分生孢子或菌丝（先接缺陷型，后接野生型），然后在培养基上放入一灭菌的折叠滤纸，25℃温箱进行混合培养。 注意要贴上标签，写明亲本菌株、杂交日期、自己的名字。（记号笔写在试管上） 在杂交后5-7天就能看到许多棕色的原子囊果出现，以后原子囊果变大变黑成子囊果，在约21天左右，就可在显微镜下观察。 接种环的制作 酒精灯灯芯的制作 无菌操作技术练习 实验预期结果： 实验用赖氨酸缺陷型（Lys-）与野生型（Lys+）杂交，得到的子囊孢子分离为4个黑色的（+）和4个灰色的（-）。 黑色孢子是野生型，而赖氨酸缺陷型孢子成熟迟，在野生型孢子成熟变黑时，还未变黑，而呈浅灰色。 根据黑色孢子和灰色孢子在子囊中的排列顺序，可知合子在减数分裂时，基因和着丝粒之间发生交换的情况。 注意事项： 观察子囊孢子时，要掌握适当的时期。如果时间偏早，虽有子囊，但孢子均未成熟，无论野生型还是缺陷型都显灰色； 过迟都成熟了，全为黑色，都不能分辨子囊类型； 最好在子囊果发育至成熟大小，子囊壳开始变黑时，每日取几个子囊果压片观察，到合适时期置于4~5℃冰箱保存。 Ｂ.植物染色体组型分析 实验目的： 1.了解染色体组型分析原理及各项参数的意义； 2.学习染色体组型分析的方法。 实验原理： 染色体组型分析（核型分析）就是分析细胞中染色体的数目、大小、形态、着丝点的位置以及次缢痕、随体的有无等形态特征，并用表格、图示将这些特点展示出来。 染色体的形态以有丝分裂中期最为显著，所以一般都分析该时期的染色体。 另一类是分析减数分裂（粗线期）时期的染色体数目和形态，以得到染色体组型。 核型分析通常包括两方面的内容： A. 确定一物种的染色体数目 B. 辨析每条染色体的特征 染色体组型分析常用指标： 1. 染色体数目： 一般以体细胞染色体数目为准，至少统计5~10个个体、30个以上细胞的染色体数目为宜，在个体出现不同数目时，则应该如实记录其变异幅度和各种数目的细胞或百分比，而以众数大于85%者为该种类的染色体数目。 染色体的排列原则： ①染色体的大小（即长度） ②着丝粒的位置 ③特殊标记，如随体的有无 染色体组型分析常用指标： 2. 染色体绝对长度：以微米表示，可在显微镜下通过测微尺测量，也可在放大的照片上进行，然后按下面公式计算： 染色体组型分析常用指标： 3. 相对长度：以百分数表示，即： 染色体组型分析常用指标： 4. 染色体长度比： 指核型中最长染色体与最短染色体的比值，即： 染色体组型分析常用指标： 5. 臂比值： 指长臂和短臂的长度（分别量到着丝点中部）比值，即： 染色体组型分析常用指标： 6. 着丝点位置： 根据臂比值可将染色体分成以下几种类型： 染色体组型分析常用指标： 7. 次缢痕及随体 次缢痕的有无及位置，随