农用杀虫抗生素研究.pdfVIP

第六届全国新农药创制学术交流会论文集 农用杀虫抗生素的研究 杨星 张育雷姚登丰陶黎明 (国家南方农药创制中心上海基地。上海市农药研究所，上海，200032) 擒要在农用杀虫抗生素的筛选研究中，我们发现一株放线菌所产生的次级代谢产物对蚜虫、螨等具有 良好杀灭作用；经对活性物质的分离、提取，得到了活性化合物的纯样品；对此活性化合物进行了室内生 物活性的测定。并完成了质谱和NMR等用于结构剖析的光谱学工作，．正在进行结构的解析。 关键词微生物筛选杀虫活性分离 1． 前言 农用杀虫抗生素在当前农业及畜牧业中的应用非常普及，在二十世纪五十年代初 就有报道称抗霉素A(ActimycinA)具有杀虫杀螨作用；六十年代报道的杀虫抗生素有 和欧共体批准生产应用，影响较大，被称之为农用抗生素发展的一个里程碑。七十年 代日本报道的四活菌素(Tetranactin)于七十年代末正式投产，另外还有密尔比菌素 发，被认为是农业生产中最有潜力的杀虫抗生素。之后影响较大的是陶氏公司对多杀 菌素(Spinosad)的发现和成功开发。我国农用杀虫抗生素的研究起步较晚，已报道有 的杀蚜素，上海农药研究所的浏阳霉素、上海农科院的韶关霉素，江西农业大学的南 昌霉素和梅岭霉素；在畜用上的还有海南霉素等。国内自主开发的杀虫抗生素与国外 的杀虫抗生素相比，在生产规模和使用范围来看，其影响力还是比较小的。在杀虫抗 生素中，对农作物虫害防治起着较大作用的有杀螨素、阿维菌素、多杀菌素等。我们 在农用抗生素的筛选研究中，经过对5000多株微生物菌株的发酵培养物的杀虫活性测 定，发现了一株放线菌所产生的次级代谢产物，对芽虫和螨等具有良好的杀灭作用， 经初步的分离鉴定，发现与现有已知的杀虫物质有所不同，目前，我们正在对这一活 性物质进行图谱解析以明确其结构。 2． 材料与方法： 2．1 培养基： 固体斜面培养基：高氏一号培养基：发酵培养基：葡萄糖2％，酵母粉0．4％，黄 7．2。 豆饼粉2．5％，淀粉1％，牛肉膏O．4％，氯化钠O．2％，磷酸氢二钾0．005％；pH 2．2微生物培养及发酵： 微生物菌株于斜面上在28。C条件下培养七到十天，至孢子丰满后备用。在250ml 三角瓶中装入50ml培养基，消毒灭菌后接入斜面种子，于28。C条件下发酵培养四天。 2．3杀虫活性测定： 采用蚕豆苗与豆蚜同时浸药液来测定杀蚜虫的活性；采用蚕豆苗与叶螨同时浸药 液来测定杀螨的活性：采用在水体中直接加入药剂来测定杀灭孑孓的活性。 2．4活性物质的初步鉴定： 采用乙酸乙酯、正丁醇于不同的PH条件下对发酵液进行萃取后分别测定有机相及 水相的杀虫活性，以确定活性物质在不同酸碱度下的溶解性。采用于不同pH条件下加 ．227． 第六届全国新农药创制学术交流会论文集 热发酵液到100。C维持15分钟后测定发酵液的杀虫活性，以确定活性物质在不同酸碱 度下的稳定性。采用薄层层析法分离活性物质以测定活性物质的紫外光谱，确定活性 物质是否为多稀类物质，以确定活性物质在田间的的稳定性。 2．5活性物质的提取分离： 经方法四的分析后，可以知道此杀虫活性物质的溶解性，故采用酯溶性物质的提 取方法。具体为将经培养后的发酵液用离心法分成上清液和菌丝体两部分，菌丝体用 80％丙酮浸泡过夜后，用离心去除菌丝体，丙酮浸泡液经脱丙酮后与上清液合并，将合 并后的水相用乙酸乙酯以1：l(V／V)萃取二次，弃去水相。二次有机相合并后采用真 空薄膜浓缩成油状物。此油状物上硅胶柱层析，用氯仿：甲醇不同的混合比作为洗脱 液，其中l：0(V／V)500ml；i0-1(V／V)i000ml：5：l(V／V)1000ml：2：1 (V／V)1000m1分别进行洗脱，用部分收集器对流出液进行分部收集。经杀虫活性检 测后，合并活性部分，真空浓缩成油状物；此油状物用甲醇溶解后，用硅胶板进行薄 层层析，在紫外灯下刮取不同的条带，用甲醇洗下后测定生物活性以确定活性带。刮 取多次薄层层析后的活性成分，用甲醇溶出后做下一步纯化。甲醇溶出的活性成分用 高效液相法分析，采用NucleosilC．。柱，在210nm