乙醇提取浮游藻类叶绿素a的方法优化研究.pdfVIP

一 316一 江苏农业科学 2013年第41卷第 1期 韩建刚，荆玉静，李萍萍．乙醇提取浮游藻类叶绿素a的方法优化研究[J]．江苏农业科学，2013，41(1)：316—318 乙醇提取浮游藻类叶绿素 a的方法优化研究 韩建刚 ，荆玉静 ，李萍萍 (1．江苏大学环境学院，江苏镇江 212013；2．南京林业大学森林资源与环境学院，江苏南京210037) 摘要：以莱茵衣藻 (真核)和铜绿微囊藻(原核)为材料，采用热乙醇法 (80℃，提取 1、2、3h)和冷乙醇法(4℃，提 取6、12、24h)分别提取并测定水样中藻体叶绿素 a含量。结果表明，在采用热乙醇法提取衣藻与微囊藻叶绿素a情 况下，当样品叶绿素 a含量分别大于(5．90±0．14)、(7．74±0．17)m L时，不同提取时间(1、2、3h)所得叶绿素a含 量无显著差异。对冷乙醇法而言，当2种藻叶绿素a含量分别高于(3．71±0．07)、(5．72±0．02)mr／L时，不同提取 时间(6、12、24h)所得叶绿素a含量无显著差异。热乙醇法提取 1h比冷乙醇法提取6h获得的叶绿素a含量还高。 采用冷、热乙醇法提取叶绿素a时，提取时间应分别选择6、1h；当样品叶绿素含量 a较低 (6．0mg／L)时，这2种方 法在不同提取时间的测定结果均易产生较大的变异。 关键词：叶绿素a；乙醇；莱茵衣藻；铜绿微囊藻；变异系数 中图分类号：Q31 文献标志码 ：A 文章编号：1002—1302(2013)01—0316—03 浮游藻类生物量是水生生态系统研究的重要指标…，叶 1 材料与方法 绿素 a通常用于藻体生物量的快速估算 。目前提取叶绿素 a的方法主要有超声波法、反复冻融法、延时提取法、丙酮加 1．1 试验材料 热法、热乙醇法、混合溶剂法等 。对于提取剂的选择，大多 莱茵衣藻 (Chlamydomonasreinhardtii)和铜绿微囊藻( 一 采用丙酮、乙醇、甲醇等 ，其中，以乙醇作为提取剂的方 crocysisaeruginosa)，购 自中国科学院武汉水生生物研究所淡 法即乙醇法已被广泛应用。乙醇法主要分为冷乙醇法 (4℃) 水培养室。莱茵衣藻是绿藻门衣藻属的真核生物，铜绿微囊 和热乙醇法 (50—90℃)。以往研究表明，这2种方法在应用 藻为蓝藻门微囊藻属的原核生物，莱茵衣藻和铜绿微囊藻的 过程中提取时间的选择并不一致，甚至差异较大。例如，冷乙 培养基分别为SE和BG11。将这2种藻的藻种接种于相应培 醇法提取时间在6～24h之间选择 ，热乙醇法的提取时间大 养基中(藻液与培养液比例为 1：10)，分别于最佳环境温度 多为 1—3h 4|’“。 。提取方法本身(冷、热乙醇)及提取时 25、28℃下培养。光照强度为2500lx，光暗比为 12h：12h。 间的差异势必对叶绿素a含量的测定结果产生深刻影响，然 藻体开始明显增殖后 (培养4～5d)，根据藻体浓度变化采集 而 目前有关该影响的比较与评估研究还鲜有报道。本研究以 培养体系中水样 ，用冷、热乙醇法提取并测定叶绿素a含量。 富营养化过程中常见的真核藻种莱茵衣藻和原核藻种铜绿微 1．2 提取 与测定方法 囊藻为材料 ，采用冷、热乙醇法分别在不同提取时间提取并测 用移液枪从培养体系中吸取 10mL藻液，注入离心管，置 定水样中叶绿素 a含量，以期明确 2种方法 的最佳提取时 于4℃冰箱24h。取出后以4500r／min离心 15min，去除上 间，并比较两者的差异，为乙醇法 的优化与应用提供理论 清液，采用以下2种方法处理 ：(1)加入 5mL80℃ 的90％乙 依据。 醇 ，摇匀，在80℃的水浴锅 中分别浸提 1、2、3h；(2)加入