禽呼肠孤病毒σ3基因的真核表达与其免疫效果研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集 禽呼肠孤病毒a3基因的真核表达及其免疫效果研究。 谢芝勋，谢丽基，刘加波，唐小飞，邓显文。庞耀珊，谢志勤 (广西兽医研究所南宁530001) [摘 要] 采用RT—PCR技术扩增禽呼肠孤病毒ARVS1133毒株的03基因，将口3基因克隆至真核表达载体 S1133进行攻毒，使用RT— 码框架均正确，成功构建了真核表达载体重组质粒pcDNA--03。分别免疫SPF鸡2次后，用ARV 著(Po．05)．试验结果表明，使用ARVa3基因构建的真核表达质粒来免疫SPF鸡，鸡只获得了较好的免疫保护作用。 [关键词]禽呼肠孤病毒；口3基因F ’ pcDNA3．1(+)f免疫保护 reovirus，ARV)属于呼饲养于无菌罩中。 禽呼肠孤病毒(Avian 肠孤病毒科，呼肠孤病毒属，是鸡病毒性关节炎和腱 1．3主要酶与试剂TaqDNA聚合酶、RT--PCR试 I、Not 鞘炎的主要病原。临床上主要引起鸡关节炎／腱鞘 剂盒和限制性内切酶EcoR I购自大连宝生 I+Hind 炎、吸收障碍综合症、矮小综合症和呼吸道病等多种 物公司。MkDNA／EcoRMarker，低分子 疾病，造成很大的经济损失[1]。一些研究者据此进行 量蛋白Marker，T4DNA连接酶和质粒提取试剂盒 了不同类型ARV疫苗的探索，包括灭活疫苗、弱毒 苗和亚单位疫苗等乜’3]。DNA疫苗是将编码目的抗公司。弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂购自Sigma 原蛋白基因序列的真核质粒导入机体细胞，通过宿 公司。 1．4ARV 主细胞的转录和翻译系统合成抗原蛋白，表达出的 03基因的获取 抗原蛋白经MHCI类和II类分子提呈免疫系统， 1．4．1引物的设计与合成根据Sfiapouri发表的 Bank 诱发机体产生特异性体液免疫和细胞免疫反应，其 ARV毒株S1133S1基因序列[Gen 抗原表达可持续数月[4．副。因此，DNA疫苗具备类似 自然感染的优点，成为研究的热点课题。 合成了一对跨越口3基因的特异性引物； ARV aat S1基因编码的d3蛋白携带有ARV的特 atggcg 上游引物序列XZl33：5’--gcgtcg 异性中和反应的表面抗原，能刺激机体产生保护性 cteaatcca ggt tg一3’； 的中和抗体[6’7]，是研制禽呼肠孤DNA疫苗理想的 ctt 下游引物序列XZl34：5’--ageggccgc agg tac一3’； 基因，但国内外都未见有ARV03基因真核表达质 cgatgcegg tgt 粒的构建。本研究构建了ARVd3基因的真核表达