庆大霉素生物合成基因genB4PB3K模块功能研究.pdfVIP

  庆大霉素生物合成基因 genB PB K 模块功能的研究 4 3 陈洲琴 洪文荣* （福州大学生物科学与工程学院，福州350108 ） 摘要:以绛红色小单孢菌 G1008 基因组为模板，庆大霉素生物合成基因簇上的 genB4-genK 为靶 标，扩增靶标上、下游序列作为同源交换臂，以温敏型质粒pKC1139 为基础，构建重组质粒 pBK003 ， 通过去甲基化修饰后，经接合转移导入绛红色小单孢菌 G1008，利用安普霉素抗性筛选，得到阳性 转化子 BK1 。通过 PCR 和测序鉴定，证明 pMK003 已插入绛红色小单孢菌 G1008 基因组的目标位 点。经松弛培养后，筛选得到双交换菌株，命名为绛红色小单孢菌 GBK1(△genB4-K ），成功敲除了 绛红色小单孢菌 G1008 庆大霉素生物合成基因簇上的 genB PB K 模块，为该模块功能研究奠定了基