9-顺式维甲酸抗肿瘤作用及其机制研究.pdfVIP

i 中文摘要 9一顺式维甲酸的抗肿瘤作用及机制研究 摘 要 目的：本研究采用人胃低分化黏液腺癌细胞(MGC80．3) 为靶细胞，观察9一顺式维甲酸(9．cisRA)对肿瘤细胞生长抑 制、细胞周期影响和凋亡诱导作用，以及9一cisRA对心承a 核受体表达及细胞周期蛋白cyclinDl和细胞周期蛋白依赖 性激酶CDK4表达的影响，探讨9一cisRA抑制肿瘤的作用机 制。 方法： 1 MTT比色法检测9．cisRA的抗癌活性。 2倒置光显微镜、透射电子显微镜观察细胞形态结构改变： 核染色质凝集及区分坏死细胞。 3 流式细胞术分析9．cisRA对细胞周期的影响和诱导凋亡 率的变化。 4琼脂糖凝胶电泳分析凋亡细胞DNA片段。 5 mRNA 水平表达的影响。 结果： 1 h最大抑制率达64．72％，半数抑制浓 岬ol／L浓度作用96 度为8．07岬ol／L，并且9．cisRA的生长抑制作用呈时间． 剂量依赖性。 2细胞形态学改变：实验组细胞出现明显的形态学变化。 中文摘要 MGC80．3为贴壁生长型细胞，9一cisRA作用后，细胞由 多角形变成圆形，细胞折光性降低，胞浆内颗粒增多。 随着作用时间的延长，部分细胞脱壁呈半悬浮状态，随 后细胞皱缩，裂解似爆炸开的“菜花状”；荧光显微镜下 可见，9．cisRA组细胞染色质浓缩呈亮珠状并形成凋亡小 体等典型的凋亡形态学改变；电镜下可见凋亡细胞中， 细胞器变性，染色质边集，沿核膜内缘呈团块状分布。 3 9．cisRA对细胞周期的影响：流式细胞仪分析显示，10 延长，S期细胞比例较对照组明显减低，细胞阻滞于G。 期，尤以96h最为明显，G0／Gl期细胞百分率明显升高， S期的细胞数减少，由对照组的(26．3土1．3)％减少到 抑制肿瘤细胞增殖和DNA的合成。 性，药物作用后72h开始出现典型亚二倍体凋亡峰，于 96 h最明显，此时细胞凋亡率达68．5％。 5 琼脂糖凝胶电泳结果：1O岬ol／L的9．cisRA处理 MGC80．3细胞72、96、120 h，从中提取的DNA电泳， 72h开始出现明显的梯状带，随着作用时间的延长，梯 状带条带增多，条带亮度也增加。 6 mRNA表达的影响： 9．cisRA对IⅨRcL、CyclinDl、CDK4 与对照组比较，96h实验组IⅨRQ受体表达增加， 中文摘要 关。 结论： 1 9一cisRA可明显抑制MGC80一3细胞的生长，抑制作用呈 现时间．剂量依赖性。 2 作用呈现时间依赖性。 3 ImPCR法结果显示9．cisRA在诱导肿瘤细胞凋亡过程中 明9．cisRA通过核受体途径调节细胞周期蛋白及蛋白激 酶的表达诱导肿瘤细胞凋亡。 关键词：9．顺式维甲酸；MGC80．3细胞系；生长抑制； 凋亡；细胞周期；基因表达 英文摘要 StudiesonTudiesonAnti．rl弋umorActivitiesof 9．CisretionicAcidandItsMechanism ABSTRACT theefrectof9一cisretinoicacid objectiVe：Tostudy (9一cisRA)on inthe prolif．eration，cell