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Fractalkine基因真核表达质粒的构建及其在小鼠肝癌细胞中的表达.pdf
第30 卷 第1期 西 南 师 范大学 学 报 ( 自然科学版) 2005 年2 月
Vol. 30 N o. 1 Journal of Southwest China Normal University ( Natural Science) eb. 2005
: 1000 5471(2005) 01 0122 04
Fractalkine
唐 俐, 曾 彦, 胡 鹏, 彭明利, 兰英华, 任 红
, 400010
: ractalkine( K) , , ,
, RT PCR , D2 2 K cDNA, pCR21 TOPO , ,
pIRES K ; MM45TLi , G418
, RT PCR K . :
DNA , RT PCR
MM45TLi K .
: fractalkine; MM45TLi ; ;
: R7302 : A
( chemokines) ,
[ 1 3]
, . ractalkine( K)
[ 4, 5]
CX3C , NK T . T NK
( dendritic cell, DC) 3 . ,
, , , K
. K ,
, .
1
11
MM45TLi ; D2 2 TOP10
Labotory for Experimental Oncology ; T OPO ( Invitrogen) , pIRES
( BDClontech) ; RNA , ( Qiagen) ; ( N ewEn
gland) , T4 DNA ( Promega) , RPMI 1640( Hyclone) ; G418( Sig
maAldrich) ; Lipofectamine 2000 ( Invitrogen) ; K ( R D) ;
SABC AP ( ) .
: 2004 05 19
: ( 04 2 047) ; ( 20040631012) .
: ( 1970 ) , , , , , .
: , , .
第1期 唐 俐, 等: ractalkine 基因真核表达质粒的构建及其在小鼠肝癌 胞中的表达 123
12
121 小鼠 K 基因的克隆
D2 2, RNA. cDNA, , PCR
K . PCR : 5 GCT AGC ATG GCT CCC T CG CCG CTC GCG 3 ( Nhe !
) ; : 5 AT G CA G GAC CAC GGT CAC ACT T GC GCA 3 ( Mlu !) .
1 188 bp, K , K . : 95∀ 60 s, 56 ∀ 60 s,
72∀ 90 s; 95 ∀ 50 s, 56∀ 60 s, 72∀ 90 s, 30 ; 95∀ 50 s, 56∀ 60 s, 72∀ 7 min.
10% . pCR21 TOPO, pCR21 K.
T7, M 13rev .
122 真核表达载体的构建
K , Nhe!Mlu!pCR21 K ,
pIRES, K pIRES K. TOP10 ,
, DNA .
123 MM45TLi 胞的体外转染
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