dd猪胚胎干细胞培养和建系的影响因素及对策.pdfVIP

/ 3:;=6= ?@A;BC ?D E=F=A:;BAG .H:=;H= B;8 I=H;?C?JG! E?C% $)! K?% ’! #’’) 猪胚胎干细胞培养和建系的影响因素及对策 ，# ，$ # # 况! 玲 ，冯书堂 ，余四九 ，牟玉莲 （% 甘肃农业大学，甘肃 兰州! $’’’ ；# % 中国农业科学院 畜牧研究所，北京! ’’’() ；$% 新疆农业大学，新疆 乌鲁木齐! *$’’+# ） ! ! 摘要：为解决胚胎干细胞的培养和建系受血清、饲养层、细胞因子、传代时机以及其他一些不 明因素影响而很不稳定的问题，在总结猪胚胎干细胞（,- ）培养和建系的经验教训的基础上，对一 些常规的实验方法进行了改进，提出了消除上述影响因素的对策。 关键词：胚胎干细胞；饲养层；传代；血清；培养基 中图分类号： . *) % /! 文献标识码：0! 文章编号：’’’1/) ( （#’’) ）’1’’/1’$ ! ! 胚胎干细胞是从植入前胚胎的内细胞团（234 ） 细胞被公认是研究哺乳动物发育较理想的实验材料 或原始生殖细胞（5-36 ）分离的、能在体外长期培养 模型［+ ］。 并具有多方向分化潜能和种系嵌合能力的全能性或 目前，关于干细胞的研究已经进入到干细胞的 ［，# ］ ［/ ］ 多能性细胞 。干细胞的用途非常广泛，用干细 生物规律和调控基因的研究阶段 ，但干细胞的培 胞进行器官移植，不需免疫抑制，使之成为普遍适应 养和建系是调控研究的基础，另外干细胞的建系仍 的供体［$ ］。在组织再生和修复中，骨髓和外周血液 然存在许多问题有待解决。国内的干细胞建系仅见 中的多能干细胞到达心脏，可以治疗化疗药物造成 于小鼠，其他动物并不多见。笔者对在猪胚胎干细 的心肌病。干细胞还可以修复高血压、动脉粥样硬 胞建系过程中积累的经验加以总结，并提出了消除 化引起的血管损伤。另外，干细胞还可以分化为肝 诸多影响因素的方法。 细胞代替有病的肝组织；干细胞在治疗神经系统的 ［) ］ ! #$% 的收集时机 疾病中独具优势 。 在基因治疗领域，转导基因往往是补偿缺陷基 胚胎中生殖细胞的前体称为原始生殖细胞 因的表达或抑制基因的过剩表达的，但导入基因的 （5-3 ），它最早出现在胚胎原肠胚位于原条后端的 整合表达难以精确控制，特别是外源基因插入对其 胚外组织中，原肠胚形成结束时位于尿囊基部，并进 他细胞基因产物的效应尚无法预知，更大的问题是 入后肠内胚层中，然后沿着背部肠系膜向生殖嵴迁 许多被用作基因操作的细胞体外不易被转染和增殖 移。5-3 进入生殖嵴后继续分裂［ ］，一般收集#+ 传代。胚胎干细胞（,. ）是能产生各种类型分化细 7 #( 8 的猪胚胎，这时生殖嵴的5-3 含量最高且尚 胞的干细胞，导入外源基因后能稳定地增殖传代并 未分化。笔者经试验发现，从怀孕#/ 7 # 8 的猪胚 可获得长效的表达。因此，应用遗传学技术对 胎分离的生殖嵴 ［* ，( ］ ,. ,- 细胞培养效果最好 。分离 细胞在体外进行改造，可使基因治疗更具靶向性，从 生殖嵴时应尽量将生殖嵴取完整，不要丢失5-36 ，