云南红豆杉细胞培养中紫杉醇的代谢调控.pdfVIP

维普资讯 一 6嫩 云 南 植 物 研 究 l996；18l4：45I～453 AetaBotanieaYunnaniea 云南红豆杉细胞培养中紫杉醇的代谢调控 坚 堑亘茔那【光植 (中国科学院昆明植物研究所，昆明650204) 7e／， 。．／ M ETABoLIC REGULATIoN oN TAXoL oF CELL CULTURE FRoM TAXUSYUNNANENSIS GAN Fan Yuan．PEN G Li—Ping．ZHENG Guang—Zhi (KunmingInstitute。IBotany ChineseAcademy0fSciencesKunming65020~ 关键词 。至旦坚里竺：堑 鋈 ·!兰壁， 塑拄～ Keywords Taxus1~；lna；le／lsis Cellculture．Taxol，M etabolicregulation 在前期对云南红豆杉愈伤组织肢细胞悬浮培养的研究基础 L，对提高培养细胞 中紫杉醇含量的方法包 括加八诱导子、生物台成前体以及代谢抑制剂等进行 了研究 现报告如下。 材 料 与 方 法 细胞培养 实验材料为已连续继代 25代阻上的云南红豆杉愈伤组织无性 系。细胞培养方法及条件见 前文 (甘烦远等，1995)。 生长速率测定 以每 d每 L培养基增加的细胞干重 g数，即g／Ld，表示细胞的生长速率。实验重 复不少于 3次．结果取其平均值。 紫彤醇的含量测置 按我们建立的HPLC法测定培养细胞 中紫杉醇含量 (甘烦远等，1996)，并以％ 表示。结果亦为 3次重复的平均值。 试剂的配制厦用法 人参寡培素(Ginsengoligosaccharin，简称 GO)由本实验室从新鲜人参培养细胞 制备而来，可直接溶于水并与培养基一起高压灭菌使用 (甘烦远，郑光植，1995)~苯丙氨酸 (Ph 、亮氨 酸(Leu)．氯化胆碱(chl0rocholinechloride．简称 cco用水溶解后，巴苦亭]1／(Baccatin11I)用吐温 80混 溶后，通过细菌过滤膜过滤，然后加凡到巳灭菌的培养基中。 结 果 与 讨 论 人参寡螗素对培养细胞的作用 在云南红豆杉的悬浮培养细胞中，加凡不 同旅度人参寡培素的试验结果表明，50mg／L的人参寡糖 素不仅可提高培养细胞的生长率 (比对照增加 367％)，而且还大大提高紫杉醇 的含量 (比对照增加 3 倍)，并且可使紫杉醇分泌到 培养基 的比例增加 (表 1)，其 比例 由对照的 30％提高到处理后 的 50％左 ． 中国科学院 “八五”重点项 目 t995 lt2l收稿 ．】99601 】2修回 维普资讯 452 云 南 植 物 研 究 18卷 右。加入 10mg／L的人参寡糖素亦有明显的效果，但高浓度 (10．0mg／L)的人参寡糖素作用不明显。诱 导子能增加红豆杉培养细胞中紫杉醇含量的研究亦有一些报道(Chang等、1994；Christen等．I991)。 加入紫杉醇生物合成前体的效果 加入紫杉醇生物台成的不同前体的试验结果表明：曝加适宜浓度的 Phe、Leu或 BaccataII均能提高 紫杉醇的含量 (表 2)。100mg／L的 Phe姐及 20mg／L的 BaccataⅢ均能使紫杉醇的含量提高 1倍左 右；而 50mg／L的 Leu亦能使紫杉醇含量增加 30％以上。添加前体对培养细胞的生长率作用不大。裁 们的研究结果为进一步深入研究紫杉醇的生物合成途径打下了基础。