DNS法测定谷氨酸发酵过程总糖地研究.pdfVIP

DNS法测定谷氨酸发酵过程总糖的研究 孙小丁，姜守刚，相丽新 (阜丰集团有限公司，山东莒南276600) 目前，国内谷氨酸发酵厂家对于谷氨酸发酵过程一般进行还原糖、谷氨酸产率、透光等 参数的检测，而检测还原糖时并未进行总糖的对照检测，这对于监控谷氨酸发酵生产是极大 不利的。由于谷氨酸发酵生产中糖是最主要的碳源，糖利用的情况直接反映了谷氨酸发酵生 产的正常与否，糖的检测对于谷氨酸发酵生产具有重要指导意义，然而大部分生产厂家很少 注意检测还原糖的同时进行总糖检测，谷氨酸发酵过程中还原糖与总糖之间转化、存在着动 态平衡及缓冲，单一的还原糖指标并不能直接反映谷氨酸发酵生产的真实情况，所以需要进 行总糖及还原糖双指标的同时检测，这样才能够更好的指导谷氨酸发酵整个过程。 总糖的测定方法很多，如苯酚法、葸酮比色法及3，5．二硝基水杨酸法(DNS法)111等。 由于DNS法具有准确性高、重现性好、适于大批量品的测定等特点，而被广泛采用。因此本 文对DNS法测定谷氨酸发酵过程中总糖的各影响因素做了详细分析，同时在最佳条件下对谷 氨酸发酵过程的总糖及还原糖进行了测定。 1材料与方法 1．1原料 谷氨酸发酵过程待测液：由宝鸡阜丰生物科技有限公司提供。 1．2主要试验仪器及试剂 电子天平(上海精密仪器仪表有限公司)；UV．2450型紫外可见分光光度计(岛津公司)； DZF-60530型真空干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)。 3，5．二硝基水杨酸、火亚硫酸钠、酒石酸钾钠、重蒸苯酚、分析纯葡萄糖，均为分析纯。 1．3试验方法 1．3．1 DNS法原NE21 DNS法即3，5．二硝基水杨酸比色法的英文简称。其原理是3，5一一二硝基水杨酸在中性或偏 碱性条件下与多糖水解的还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物．3．氨基．5．硝基水杨酸， 在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色呈正比。 1．3．2 DNS试剂的配制 水亚硫酸钠加入酒石酸钾钠溶液。 一66— 2008年全国氨基酸技术交流研讨会·论文集 将A、B溶液混合，加入1200mL水，贮存于棕色瓶中，暗处放置一星期后可使用。 1．3．3标准葡萄糖溶液的配制(1mg／mL) 1．3．4 DNS法测定条件的研究 1．3．4．1 DNS法测定波长的确定 水浴加热5min，流水冷却，蒸馏水定容。将葡萄糖显色液一水、水一DNS试剂(空白)、葡萄糖显 色液一DNS试剂在波长400nm．一700nm范围内进行扫描。 COOH CQOH 1 0S OH 殷馒蹦詈舣 0拼 NI-I, NO,0蚺 1．3．4．2 DNS试剂用量及放置时间的确定 沸水浴加热5min，流水冷却，定容。在1．4．2．1确定的波长下，测定不同时间的吸光度(相同 条件下测定空白溶液)． 1．3．4．3沸水浴加热时间对测定结果的影响 置沸水浴中加热反应，于不同时间取出，流水冷却，定容。在1-3．4．1确定的波长下，测定不 同加热时间溶液吸光度(相同条件下测定空白溶液)。 1．3．5盐酸用量对测定总糖的影响 1．3．5．1盐酸用量对测定总糖的影响 氧化钠中和，定容至100mL，过滤，稀释。按上述方法进行还原糖的测定。 1．3．5．2沸水浴水解时间对测定总糖的影响 取待测样品10mL，加入一定量的盐酸(1．3．5．1确定的盐酸量)，于沸水浴加热不同时间， 冷却，再以6mol／L的氢氧化钠中和，定容至100mL，过滤，稀释。按上述方法进行还原糖的 测定。 1．3．6葡萄糖标准曲线的制作 沸水浴加热(1．3．4．3确定的加热时间)，流水冷却，定容。在1．4．2．1确定的波长下，测定吸 光度并绘制葡萄糖标准曲线。