HPLC测定家兔肠组织鸟氨酸脱羧酶活性地研究.pdfVIP

HPLC测定家兔肠组织鸟氨酸脱羧酶活性的研究 张银秋1 崔步踉1 董伟林2 1天津市聚星康华医药科技有限公司，天津 300384 1北京因科瑞斯医药科技有限公司，北京 100088 2天津医科大学，天津 300070 摘 要 目的：以高效液相色谱法利用柱前衍生方法，测定及研究鸟氨酸脱羧酶的活性，建立有 效准确的高效液相色谱测定方法，进而探讨家兔肠梗阻模型的肠组织中鸟氨酸脱羧酶活性水平及 其意义。方法：本文采用高效液相色谱法，采用酶提取液从小肠组织中提取鸟氨酸脱羧酶，后者 与鸟氨酸在37℃水浴反应40min生成腐胺，再以苯甲酰氯的甲醇液衍生剂，在37℃水浴中衍生 反应40min后，用氯仿萃取三次，取有机相再经氢氧化钠(0.2mol·L-1)萃取，取有机相吹干， 甲醇复溶，进样，色谱柱为十八烷基键合硅胶柱KromasilC18(150mm×Φ4.6mm，5μm)，流动相 为甲醇-水60∶40，流速：0.8mL·min-1，泵压：1700psi，检测波长：232nm，柱温：室温，进样 量：20μL。结果：该方法的最低检测限0.11μmol·L-1。腐胺在5.7-1134