高效液相色谱法测定水产品中硝基咪唑类多组分残留量地研究.pdfVIP

高效液相色谱法测定水产品中硝基咪唑类 多组分残留量的研究 王 扬 俞钱洁 郑重莺 叶磊海 (浙江省水产质量检测中心杭州310012) 摘 要：建立了一种同时测定水产品肌肉中甲硝唑、地美硝唑、奥硝唑、替硝唑、洛硝哒唑五种硝基咪 唑类残留量的反相高效液相色谱法。水产品肌肉组织匀浆，加氯化钠、磷酸氢二钾和乙酸乙酯振荡提取， 取有机相浓缩，残余物加盐酸和乙酸乙酯溶解，正己烷去脂后过MCX柱，氨水甲醇溶液洗脱，色谱柱分 离。醋酸氨缓冲液一乙腈(86：14，V：V)为流动相，320nm紫外检测。结果显示，测定肌肉组织中甲硝唑、 地美硝唑、奥硝唑、替硝唑、洛硝哒唑的最低检测限和最低定量限1．O弘g／kg，样品中甲硝唑、地美硝唑、奥 硝唑、替硝唑、洛硝哒唑添加的浓度为2．0pg／kg时，大黄鱼中的回收率分别为72．5％，75．0％，62．7％， 72．7％．73．3％；测定的标准偏差不大于10％。本方法简便、灵敏度高、准确度和精密度均符合我国农业 部兽药残留分析方法的要求。 关键词：固相萃取；高效液相色谱法；水产品；硝基咪唑 、 活性受到人们的广泛重视。主要硝基咪唑类药物有甲硝唑、二甲硝咪唑、替硝唑、奥硝唑、 洛硝达唑、地美硝唑等。体内外毒理试验证实，甲硝唑等硝基咪唑类药物对某些动物具有 致癌、致突变、损伤DNA等作用[1“]，对人具有潜在致癌性。从人类健康的角度考虑，欧盟 业部规定，禁止甲硝唑、地美硝唑作为饲料添加剂用于食品动物，禁止洛硝达唑用于所有食 品动物的任何用途L7]。硝基咪唑类药物在所有食品动物可食性组织中不得检出。 1 实验部分 1．1仪器与试剂 美国安捷伦1100高效液相色谱仪(紫外检测器)；组织匀浆机(江苏国华)；旋转蒸发仪 信)；氮吹仪(美国Organoma—tion)；Oasis 纯水过滤装置。 标准贮备液：精密称取甲硝唑、地美硝唑、奥硝唑、替硝唑、洛硝哒唑标准品(均为 100／-g／ml的混合标准贮备液(冷藏保存，可保存6个月)；标准工作液：临用时准确移取贮 备液，用流动相稀释，配制成系列浓度的标准工作液；乙腈、甲醇为色谱纯(美国天地公司)； · · 140 的，均为分析纯；水为超纯水。 1．2色谱条件 色谱柱为HC 为30／,1；检测波长为320nm。 当样品图谱和标准品色谱峰保留时间一致时，可以采用DAD对该色谱峰进行紫外光 谱特征扫描，作为定性的依据，以免出现假阳性结果。 1．3提取 并滤液，在旋转蒸发仪中浓缩至干。 1．4 净化 样品在自然重力下流出，吹干，加3．0ml水洗柱，加3．0ml2％氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱 谱测定。 2结果与讨论 2．1提取液的选择 由于硝基咪唑类药物具有两性性质，即在弱碱性条件下呈游离分子状态，在弱酸性条 件下质子化，因此加入磷酸氢二钾使溶液呈弱碱性，以便硝基咪唑类物质完全从样品中提 取出来[7’11|。国内外文献中报道多使用二氯甲烷，乙腈和乙酸乙酯作为提取溶剂[8‘9‘10]。 本试验对比了三种提取液的提取效果，发现提取样品中甲硝唑、地美硝唑、奥硝唑、替硝唑、 洛硝哒唑五种成分的回收率，乙酸乙酯均依次高于乙腈和二氯甲烷。二氯甲烷、乙腈提取 液中杂质含量明显高于乙酸乙酯；乙腈去蛋白效果好，但乙腈与水互溶，进一步萃取时乳化 现象较严重，且乙腈沸点较高，提取后不容易蒸干浓缩。采用乙酸乙酯提取动物肌肉组织 中的硝基咪唑类药物，在提取液中加磷酸氢二钾，使溶液呈弱碱性，加入氯化钠，其盐析作 用可以提高回收率。 2．2净化条件的选择 萃取样品的乙酸乙酯液中含有较低极性的杂质，如蛋白质、脂肪等脂溶性物质，液一液 萃取时容易乳化，因此考虑采用固相萃取法净化样品。据试验选用HI。B、C№MCX三种不 同填料的萃取小柱，比较回收率和峰型图可以看出，使用MCX柱时，不仅峰形好，而且五 种硝基咪唑类药物的回收率均较高。 离子交换固定相上组分的保留和洗脱主要决定于流动相中的离子强度、反离子强度和 pH，与溶剂强度关系较小。离子交换是一种竞争机制，分析物在固定相的保留或洗脱受同 · 1 41 ·