基于金纳米通道膜用于蛋白质分离地研究.pdfVIP

第26卷增刊 分析试验室 粥．26．Suppl． 2LYe7年10月 ofA【10vsisLaboratory 200r7一10 Chine靶Joumal 基于金纳米通道膜用于蛋白质分离的研究 沈健，彭斌，黄杉生’ (上海师范大学生命与环境科学学院，上海200234) 蛋白质的分离纯化技术在药物检测和制药工 修饰在纳米通道内的牛Ij；G发生了免疫反应。胱 程中具有重要意义，是生化工程和蛋白质分析的 胺盐酸盐修饰的金纳米通道对IXRD一羊抗牛IgC 一个研究热点。目前，蛋白质的分离方法很多，主 的迁移也有一定的促进作用，可能是TXRD-羊抗 要有膜分离法、电泳法和色谱法【l’2·。 牛lgG与修饰在通道内的氨基和羧基发生了氢键 采用金纳米通道膜用于蛋白质的分离已经有 作用。 报道，其分离的主要原理是利用蛋白质的尺寸差 异或所带电荷差异进行分离【3^6】。然而对分离尺 内迁移的影响 寸及等电点都相近的蛋白质混合物还未见报道。 1 Au纳米通道的制备和修饰 的纳米通道内迁移的影响。结果表明，当pH为 参照文献。方法制备Au纳米通道，通过扫描 电子显微镜(sEM)观察Au纳米通道的形貌。根据 移最快。当pH大于或小于5．0时，TXRD．羊抗牛 滤膜的孔率，每平方厘米上大约有6×10B个内径rsG的迁移速率均较慢，可能是7ⅨRD一羊抗牛I{；G 为30nln左右、长度为8—10 tan的Au纳米通道，与牛igG的免疫反应被破坏。所以本实验选择的 表明所制备的Au纳米通道为多通道阵列。 最佳pH为5．0。 通过将金纳米通道膜浸入Piranha溶液(浓5 H2S04和30％H202体积比为7：3)活化1h；然后 I如修饰膜内的迁移 将金纳米通道膜分别浸入O．02mol／L胱胺盐酸盐、 当混合溶液中同时含有IXRD．羊抗牛IsG和 F1TC-羊抗猫IgG抗体，它们通过纳米通道时，羊 2．5％的戊二醛、牛I鼬(浓度100rc,／mL)、L-赖氨酸 (0．2 tool／L)溶液中进行修饰制得牛IsG修饰的金抗牛IsG在牛Is,G修饰的通道内的迁移速率快于 纳米通道膜。 2 TXRD．羊抗牛IgG和F1TC一羊抗猫IgG工作曲线 其原因，在牛IsG修饰膜内，羊抗牛IgG除了因浓 的测定 度梯度在通道膜内进行迁移外，还与金纳米通道 TXRD的最大激发峰位置为590nln，最大发射 膜上修饰的牛IgG有特异性相互作用，牛tgc在膜 峰位置为608nm，FITC的最大激发峰位置为496 内对羊抗牛IgG进行选择性运输。而羊抗猫IsG主 nnl，最大发射峰位置为518砌。测定TXPd)．羊抗 要通过浓度梯度进行迁移。 牛够(嘞．GABIgG)的回归方程为：，=0．68+借此，在金纳米通道膜内基于抗原一抗体问 427．65C(R=0．998)；F1TC．羊抗猫IgG(Frrc—GAC 的特异性作用可以实现对尺寸及等电点相近的蛋 I赆)的回归方程为：F=一27．48+1584．77C(R= 白质的分离，是一种用于蛋白质分离潜在的好方 0．997)。 法