ABCE1基因对小细胞肺癌增殖、侵袭、迁移能力影响及研究.pdf

·中文论著摘要· ABCEl基因对小细胞肺癌增殖、侵袭、迁移 能力影响的研究 目 的 小细胞肺癌是肺癌的特殊类型，其突出特征是早期易出现淋巴及血行转移。 虽然小细胞肺癌对放射治疗和化学治疗较敏感，但容易出现耐药和复发，这些都 严重威胁着人类的健康和生命。因此筛选新的小细胞肺癌相关基因并探讨其发病 及转移机制，寻找潜在的靶向治疗基因对于小细胞肺癌治疗的研究尤显重要。 ABCEl基因属ATP结合盒转运子基因亚家族，它的eDNA编码一种分子量 为68KD的蛋白，又称核糖核酸酶L抑制因子。ABCEl基因位于细胞浆及线粒体， 该基因在人体多种组织和器官普遍表达，但表达水平不同。ABCEl基因能够抑制 细胞凋亡过程，并可能在促进蛋白质合成及细胞增殖分化过程中发挥着作用。因 小细胞肺癌细胞株NCI-H446，研究ABCEl基因对小细胞肺癌增殖、侵袭、转移 能力以及细胞凋亡的影响，同时探讨ABCEl基因在人小细胞肺癌组织、细胞株、 转移淋巴结及癌旁肺组织中的表达差异。 方 法 根据小细胞肺癌相关基因ABCEl的序列，设计引物，提取小细胞肺癌细胞株 序列设计3对SiRNA引物，寡核苷酸退火后插入到携带红色荧光蛋白报告基因 ABCEl．SiRNA-N，酶切，电泳，DNA测序鉴定。 1 48d,时后应用Westernblot及免疫组织化学法检测转染后ABCEl蛋白表达。MTT 殖能力、侵袭能力、迁移能力及细胞凋亡数目的改变。同时应用免疫组织化学法、 Wcstera blot方法，检测人小细胞肺癌组织、细胞株、、转移淋巴结及癌旁肺组织中 ABCEl的表达情况。 在上述实验基础上构建可以用于筛选阳性克隆且带有绿色荧光的ABCEl基 阳性克隆筛选，筛选ABCEl基因沉默的稳定转染细胞系。 幺七 蟹 三日 禾 经酶切和研蛆测序验证，证实pEGFP-ABCEI、 blot方法 检测发现：小细胞肺癌组织及转移淋巴结中ABCEI的表达水平明显高于癌旁肺组 织，差异具有显著性。小细胞肺癌细胞株同样显示ABCEl的高表达。 转染ABCEl．SiRNA后的小细胞肺癌细胞内可见红色荧光。在转染 的小细胞肺癌细胞与转染ABCEl．SiRNA-N的同类细胞相比增殖能力受到明显抑 制，转染ABCEl．SiRNA．N后的细胞增殖程度与对照组细胞则无明显改变。 ABCEl．SiRNA．N后的穿膜细胞数较对照组细胞则无明显增加。划痕实验显示转染 2 组的细胞明显增多。 小细胞肺癌细胞NCI-H446后，小细胞肺癌细胞内可见绿色荧光，通过(3418筛选， 获得了ABCEl基因沉默的小细胞肺癌细胞系，该细胞系的ABCEl水平明显低于未 转染SiRNA的小细胞肺癌细胞。 结论 及转移淋巴结中呈高水平表达，而在癌旁肺组织则表达较低，提示ABCEl可能参 与了小细胞肺癌的发生及进展过程。小细胞肺癌细胞株同样显示ABCEl的高表达。 细胞肺癌细胞后不仅可抑制ABCEl基因的表达，而且还能明显的抑制细胞生长， 使其增殖能力下降，降低其侵袭、迁移能力并诱导细胞凋亡。 3、成功构建了ABCEl基因沉默的稳定转染小细胞肺癌细胞系，这将为今后应 用ABCEl基因SiRNA表达载体研究ABCEl基因的作用机制提供实验基础。 关键词 小细胞肺癌；ABCEl：Westernblot,SiRNA ·英文论著摘要· of 1 Oiltheabilitiesof TheresearchABCE gene