纳米金修饰石墨电极上hIgG电化学发光免疫分析方法地研究.pdfVIP

第九届全国电分析化学学术会议论文搞娶集 D纳米电分析化学与电化学检测器件 D55纳米金修饰石墨电极上hlgG电化学发光一 免疫分析方法的研究 彭亚鸽 漆红兰 张成孝木 (陕西师范大学化学与材料科学学院，西安710062) 纳米材料以其特有的物理化学性质在生物学、化学、医学等领域展现出广阔的 应用前景。以纳米粒子构建各种纳米结构功能膜，越来越受到人们的关注，尤其是 在制作电化学传感器方面。本文以纳米金修饰石墨电极为基底电极，建立了高灵敏 度的电化学发光免疫分析方法，利用夹心法进行]hlgG含量的测定。 利用重氮盐法将鲁米诺标记在hlgG抗体上，得到鲁米诺标记抗体，标记率为 1：24。将鲁米诺标记抗体作为发光探针进行免疫分析。研究了鲁米诺标记抗体．H202 在裸石墨电极和纳米金修饰石墨电极上的电化学发光行为。图l为鲁米诺标记抗体 ．H202在裸石墨电极和纳米金修饰石墨电极上的电化学发光曲线图。从图1可以看出， 纳米金修饰石墨电极上鲁米诺标记抗体的电化学发光被极大的增强。 五tsII．_量一笛 图1鲁米诺标记抗体 -H202在裸石墨电极(a)和纳米金修饰石墨电极(b)上的电化学发光曲线图 0．10mol／L 7．4)含有6．0x10mmoi／LH202和稀释4．0x104倍的鲁米诺标记 PBS缓冲溶液(pH 抗体，扫描速度：50mV／s 利用吸附法将抗体固定在裸石墨和纳米金修饰石墨电极上，进行免疫反应，免 疫反应前后的电化学发光动力学曲线见图2。从图2可以看出，在裸石墨和纳米金修 饰石墨电极上免疫反应后，电化学发光强度均大大增强。这是因为电极上固定抗体 与待测抗原和鲁米诺标记抗体发生夹心免疫反应，将鲁米诺标记抗体带到电极表面， 施加电压产生电化学发光。比较图2a、b可以看出，在裸石墨电极上得到较小的电 化学发光信号，在纳米金修饰石墨电极上得到较大的发光信号，说明纳米金修饰电 极可显著提高检测的灵敏度。一方面可能是纳米金修饰电极增敏鲁米诺的电化学发 光强度，同时也可能是纳米金修饰电极界面良好的生物相容性和纳米金与蛋白质之 间强吸附作用，增大了电极表面抗体的固定量，使得免疫反应后鲁米诺标记抗体的 量增大所致。 优化的实验条件为：电极表面修饰3．4×10弓g／mL(以金离子计算)纳米金210 pL，电极表面修饰3．0×10。69／mL抗体35pL，控制电位+800mV，H202浓度为6．0x104 mol／L，标记抗体稀释比为1：1000，37℃免疫反应40 min。在优化的实验条件下，采 第九届全国电分析化堂．兰查垒堡垒塞塑萋苎 里塑鲞皇坌堑垡堂皇皇些兰竺塑曼壁 用夹心免疫法对hIgG进行测定。结果表明，电化学发光响应信号积分值与hIgG浓 3．0x10。99／mLhIgG作5次平行测定，相对标准偏差为3．8％。 图2裸石墨电极(a，c)和纳米金修饰石 墨电极(b，d)上免疫反应前后的电化学 发光动力学曲线图。免疫反应前(C，d) mV， 和免疫反应后(a，b)，电位：800 10。10 H202：6．0xmol／L，稀释1000倍的鲁