NK细胞分泌IL-10、TGF-β水平与HIV疾病进展关系与研究.pdfVIP

‘中文论著摘要· NK细胞分泌IL一10、TGF—P水平与HIV 疾病进展关系研究 目 的 获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency 艾滋病，是由人类免疫缺陷病毒(human 的以CD4+T细胞显著减少为主要特征，最终伴有反复机会性感染、恶性肿瘤而导 致死亡的感染性疾病。在HIV感染过程中，天然免疫和获得性免疫系统一方面受 到病毒感染的损害，细胞数量和功能发生变化，另一方面依旧发挥抗病毒的作用， 抑制病毒复制。自然杀伤细胞(naturalkillercell，NK)是天然免疫系统中的重要 效应细胞，可直接杀伤肿瘤或病毒感染的细胞，在机体早期控制肿瘤和病毒感染 中发挥重要作用。研究表明NK细胞也具有免疫调节功能，主要通过与其他免疫 细胞如T、DC、巨噬和内皮细胞等相互作用及分泌细胞因子与趋化因子两种方式 发挥免疫调节作用。最近研究发现NK细胞可通过分泌免疫调节性细胞因子白细 growthfactor-D， TGF．p)调节自身及其他免疫细胞反应。目日订研究只发现正常人NK细胞在体外刺 激下，可以分泌IL．10、TGF．D，但足对于HIV感染者NK细胞分泌调节性细胞因 子lL．10、TGF．D情况，及其与HIV疾病进展的关系，国内外尚未报道。本研究 以感染HIV的男¨j州tE恋人群为研究埘缘，心J『j多色流』弋细胞分析技术，探讨 系。 方 法 ． 1、研究对象 29例HIV抗体阳性感染者，未接受过抗病毒治疗，且无明显机会性感染。12 normal control，NC)，HIV抗体阴性，血常规及肝肾功 例诈常对照(HIV-negative 1 正常，无免疫系统疾病。本研究内容获得参加者的书面知情同意。 2、CD4+T细胞绝对值检测 将2001 室温避光15min，应用FACS 果，得到CD4+T淋巴细胞的绝对值。 3、NK细胞百分比及其分泌IL．10、TGF．13的检测 密度梯度离心法提取外周血单个核细胞：加或不加rIL．12(10 ng／m1)与rlL．15 (50 Fixation／Permeabilization 色，40C，30分钟；使用BD Kit进行 Cytofix／CytopermTM 分钟：洗涤细胞后用1％多聚甲醛固定。应用FACSLSRII流式细胞仪进行检测， BD FACSDivaTM软件分析结果。 4、IL．10、TGF．p对NK细胞功能影响的测定 BD公司)进行表面避光染色，4C，。30分钟：使用BD Fixation／Permeabilization Kit(美幽BD公司)进行破膜20分钟，洗涤细胞后，用 FACS 聚IlI醛Ⅲ定。应jfjI LSRII流J=℃细胞仪进行检测，BDFACSDivaTM软件分析 结果。 5、HIV病毒载量测定 取1 作按照操作说明书进行。 2 6、统计学分析 应用SPSSl7．0软件包进行统计分析，所有数据以中位数表示，两组问实验 指标的比较采用Mann-WhitneyU检验，相关性分析采用Spearman秩相关检验， P0．05为有统计学意义。 。 结果 1、HIV感染者NK细胞及各亚群构成情况 本研究对HIV感染者及正常对照组(NC组)，检测N