MMP-2、MMP-9对脑出血损伤大鼠实验与研究.pdfVIP

MMP一2、MMP一9对脑出血损伤大鼠实验研究 摘 要 目的：脑／l缸(intracerebral 杂的病理生理过程，至今未阐明，近几年来研究表明基质金属蛋白酶 (matrix 促进炎症反应发生，加重脑水肿，使神经功能缺失加重。本实验通过 观察大鼠ICH后基质金属蛋白酶．2(matrix MMP．2)、基质金属蛋白酶．9(matrix 态表达及其与血肿周围脑组织含水量的关系，和观察七叶皂苷钠对 机制，进一步了解ICH后继发损伤的病理生理过程，为治疗ICH提 供理论依据。方法：将雌雄各半Wistar大鼠250只随机分为4组：正 常对照组、假手术组、ICH组和七叶皂苷钠治疗组。每组均观察手术 的改变，每个时间点10只大鼠。治疗组模型：按照50mg／kg．d七叶． 皂昔钠在各时间点向大鼠ICH腹腔注射。ICH组模型：采用立体定 向仪把自体血注入大鼠右侧尾状核制作大鼠ICH动物模型。假手术 组模型：手术操作程序与ICH组相同，但尾状核不注入自体血，针 h进 留置约10分钟。正常对照组模型：大鼠不进行手术。在术后2 15d进行神经功能障碍评分。在术后各相应时间点取5只大鼠灌注固 定后取材作脑片，进行免疫组织化学染色和HE染色，观察MMP．2、 MMP．9蛋白动态表达。根据显色的强弱，将免疫组织化学的结果分 强阳性。取连续组织切片在同一强度及放大倍数观察，采用阳性细胞 计数法。每只大鼠每个指标选一张脑切片，在400倍光镜下随机选测 血肿周围的4个互不重叠的视野，每个时点共计20个视野，计数每 个视野的该指标阳性细胞数，取均数为各时点该指标阳性细胞数。另 取5只大鼠在术后各相应时问点断头取胼淄I织，用干湿重法测定血肿 周边脑组织含水量。结果：在实验过程中36只大鼠死亡，ICH组和 治疗组有15只大鼠手术后模型评价为0级，手术成功率84．75％。 ICH组在6h～120h的神经功能评分与正常对照组、假手术组、治疗组 比较，神经功能评分下降，差异具有显著性(倍0．000，P=0．000， 功能评分与24h相比，差异无显著性(P=0．51)，与其它各时点相比， P=0．00∞；ICH组在6h～72h脑组织含水量与正常对照组、假手术组、 治疗组比较，血肿周围脑组织含水量升高，差异具有显著性(P_O．000， 峰，在48h血肿周围脑组织含水量与24h相比，差异无显著性(P_0．16)， 常对照组、假手术组、治疗组比较，MMP．2蛋白表达升高，差异具 在6h达到高峰，与其它各时间点相比较，差异具有显著性(P=O．000；· 间点MMP．9蛋白表达与正常对照组、假手术组、治疗组比较，差异 MMP．9蛋白 具有显著性(P=0．000，P=0．000，P=0．ooo)；在ICH组， 无显著性(P-O．119)，与其它各时间点比较，差异具有显著性 组，MMP一2蛋白表达与血肿周围脑组织含水量无相关性(r0．135， MMP．2蛋白表达与血肿周围脑组织 --0．505。P=0．202)。在ICH组， 蛋白表达与血肿周围脑组织含水量无相关性p=一O．434，P=0．284)， MMP．9蛋白表达与血肿周围脑组织含水量有相关性(r=0．907， P=0．858)。HE染色：正常对照组、假手术组大鼠脑组织结构完整， 各层细胞排列整齐，无肿胀。ICH组大鼠脑组织在注血后6h可见血 肿周围散在中性粒细胞等炎细胞浸润；24h可见神经细胞数目减少，排 列紊乱，神经细胞、胶质细胞轻度肿胀，大量中性粒细胞浸润；48h 血肿周围细胞肿胀明显，神经细胞变性、坏死，出现大量泡沫细胞， 组织疏松明显，表现重度水肿；120h软化区组织疏松减轻，小胶质 细胞增生，可见少许新生毛细血管。七叶皂苷钠治疗后与上述病理改 变有不同程度的改善。结论：自体血制作大鼠ICH动物模型，制作方 法简单，易于操作，与人脑出血病理生理变化基本一致，可作广泛使 增加及脑组织含水量增多，说明MMP．2、MMP一9参与了BBB的损 伤，加重脑水肿。MMP．2的蛋白表达在6h达高峰，以后逐渐下降， 说明1MMP．2主要在早期参与BBB的损害，促进脑水肿的形成： MMP．9蛋白表达开始在6h上升，24h--48h达高